| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第15-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-33页 |
| 1.1 布鲁氏菌病及其流行概况 | 第17-20页 |
| 1.2 布鲁氏菌致病机制及毒力相关基因的研究进展 | 第20-25页 |
| 1.2.1 布鲁氏菌分子结构决定其侵入宿主细胞以及抵抗细胞内恶劣环境 | 第20-21页 |
| 1.2.2 布鲁氏菌的胞内转运 | 第21-24页 |
| 1.2.3 布鲁氏菌免疫逃逸 | 第24-25页 |
| 1.3 布鲁氏菌致病特点及临床防控技术现状 | 第25-28页 |
| 1.3.1 人布鲁氏菌病治疗方法 | 第25-27页 |
| 1.3.2 疫苗防控及其缺陷 | 第27-28页 |
| 1.4 抗病原微生物新药靶标鉴定技术的研究进展 | 第28-29页 |
| 1.5 抗布鲁氏菌新药靶标的研究进展 | 第29-30页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第30-31页 |
| 1.7 研究内容与技术路线 | 第31-33页 |
| 1.7.1 研究内容 | 第31-32页 |
| 1.7.2 技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章 羊种布鲁氏菌(NI)突变株文库转座子插入位点的鉴定 | 第33-50页 |
| 2.1 引言 | 第33-34页 |
| 2.2 材料 | 第34-37页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第34-35页 |
| 2.2.2 所用试剂及其配制方法 | 第35-36页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第36-37页 |
| 2.2.4 引物 | 第37页 |
| 2.3 试验方法 | 第37-42页 |
| 2.3.1 羊种布鲁氏菌(NI)转座子插入突变株文库复制 | 第38-39页 |
| 2.3.2 羊种布鲁氏菌(NI)转座子插入突变株文库灭活及活菌检查 | 第39页 |
| 2.3.3 羊种布鲁氏菌(NI)转座子插入突变株文库的基因组提取 | 第39页 |
| 2.3.4 羊种布鲁氏菌(NI)转座子插入突变株文库基因组酶切 | 第39-40页 |
| 2.3.5 羊种布鲁氏菌(NI)突变株文库基因组酶切片段的连接 | 第40页 |
| 2.3.6 羊种布鲁氏菌(NI)突变株文库第一轮反向PCR扩增 | 第40-41页 |
| 2.3.7 羊种布鲁氏菌(NI)突变株文库第二轮反向PCR扩增 | 第41页 |
| 2.3.8 羊种布鲁氏菌(NI)突变株文库PCR扩增产物测序 | 第41页 |
| 2.3.9 羊种布鲁氏菌(NI)突变株文库转座子插入位点确定 | 第41页 |
| 2.3.10 羊种布鲁氏菌(NI)突变株文库转座子插入位点试验验证 | 第41-42页 |
| 2.3.11 工具和软件 | 第42页 |
| 2.4 结果 | 第42-49页 |
| 2.4.1 布鲁氏菌NI突变株文库的复制、灭活及活菌检验 | 第42页 |
| 2.4.2 布鲁氏菌NI突变株文库中菌株基因组的提取 | 第42-43页 |
| 2.4.3 布鲁氏菌NI突变株基因组的酶切、连接 | 第43-44页 |
| 2.4.4 连接产物的PCR扩增 | 第44-45页 |
| 2.4.5 PCR产物的二次PCR扩增 | 第45页 |
| 2.4.6 分析测序结果查找转座子插入位点 | 第45-47页 |
| 2.4.7 布鲁氏菌(NI)突变株转座子插入位点鉴定方法准确性评价 | 第47页 |
| 2.4.8 获得已知插入位点的突变株文库 | 第47-49页 |
| 2.5 讨论 | 第49页 |
| 2.6 小结 | 第49-50页 |
| 第三章 转座子插入突变的基因及其特征 | 第50-59页 |
| 3.1 引言 | 第50页 |
| 3.2 材料和方法 | 第50-51页 |
| 3.2.1 转座子插入位点序列分析 | 第50页 |
| 3.2.2 转座子插入位点在基因组中的分布 | 第50-51页 |
| 3.2.3 转座子在基因中插入位置计算 | 第51页 |
| 3.2.4 基因大小与转座子插入次数相关性分析 | 第51页 |
| 3.2.5 转座子插入位点在基因组中的分布图 | 第51页 |
| 3.3 结果 | 第51-57页 |
| 3.3.1 转座子插入在TA序列 | 第51-52页 |
| 3.3.2 转座子插入位置及其在的染色体中的分布 | 第52-54页 |
| 3.3.3 转座子在基因中的位置 | 第54-55页 |
| 3.3.4 转座子插入同一基因次数 | 第55-57页 |
| 3.3.5 基因大小与转座子插入次数相关性 | 第57页 |
| 3.5 讨论 | 第57-58页 |
| 3.6 小结 | 第58-59页 |
| 第四章 布鲁氏菌(NI)候选必需基因的预测 | 第59-81页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 材料和方法 | 第59-60页 |
| 4.2.1 布鲁氏菌候选必需基因的预测 | 第59-60页 |
| 4.2.2 布鲁氏菌候选必需基因的COG功能聚类 | 第60页 |
| 4.2.3 分析布鲁氏菌候选必需基因参与的KEGG通路 | 第60页 |
| 4.2.4 分析候选必需基因在前导链后随链以及染色体的分布 | 第60页 |
| 4.4 结果 | 第60-77页 |
| 4.4.1 布鲁氏菌(NI)候选必需基因 | 第60-71页 |
| 4.4.2 布鲁氏菌候选必需基因COG功能聚类 | 第71-72页 |
| 4.4.3 布鲁氏菌(NI)候选必需基因参与的KEGG通路 | 第72-74页 |
| 4.4.4 布鲁氏菌(NI)候选必需基因在前导链和后随链分布的不对称性 | 第74-77页 |
| 4.5 讨论 | 第77-80页 |
| 4.6 小结 | 第80-81页 |
| 第五章 布鲁氏菌(NI)突变株阵列的制备及毒力相关基因的筛选 | 第81-98页 |
| 5.1 引言 | 第81页 |
| 5.2 材料 | 第81-83页 |
| 5.2.1 菌株 | 第81页 |
| 5.2.2 细胞系 | 第81页 |
| 5.2.3 主要的试剂和耗材 | 第81-82页 |
| 5.2.4 主要培养基 | 第82页 |
| 5.2.5 细胞培养所用试剂 | 第82页 |
| 5.2.6 免疫荧光所用试剂 | 第82页 |
| 5.2.7 主要仪器设备 | 第82-83页 |
| 5.3 方法 | 第83-84页 |
| 5.3.1 布鲁氏菌(NI)突变株阵列中突变株的选择原则 | 第83页 |
| 5.3.2 布鲁氏菌(NI)突变株阵列的制备 | 第83页 |
| 5.3.3 细胞感染试验 | 第83-84页 |
| 5.3.4 免疫荧光试验 | 第84页 |
| 5.3.5 细胞感染,细菌计数试验 | 第84页 |
| 5.4 结果 | 第84-96页 |
| 5.4.1 布鲁氏菌(NI)突变株阵列的制备 | 第84-85页 |
| 5.4.2 布鲁氏菌毒力相关基因第一轮筛选 | 第85-86页 |
| 5.4.3 细胞毒性基因的筛选 | 第86-87页 |
| 5.4.4 布鲁氏菌毒力相关基因的第二轮筛选 | 第87-95页 |
| 5.4.5 布鲁氏菌毒力相关基因转座子插入位点的验证 | 第95页 |
| 5.4.6 布鲁氏菌毒力相关基因的COG功能聚类 | 第95-96页 |
| 5.5 讨论 | 第96-97页 |
| 5.6 小结 | 第97-98页 |
| 第六章 结论 | 第98-99页 |
| 第七章 创新点 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-117页 |
| 附录 | 第117-133页 |
| 致谢 | 第133-135页 |
| 个人简介 | 第135页 |
