| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩写名词表 | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-43页 |
| ·甘蓝型油菜细胞核雄性不育的类型及应用 | 第16-17页 |
| ·甘蓝型油菜显性细胞核雄性不育(Dominant GMS,DGMS) | 第16页 |
| ·甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育(Recessive GMS,RGMS) | 第16-17页 |
| ·转基因细胞核雄性不育 | 第17页 |
| ·植物雄性器官建成的相关基因的功能和调控 | 第17-18页 |
| ·植物花粉囊发育的时空特征以及相关基因的研究进展 | 第18-39页 |
| ·花粉囊早期各细胞组织的分化和控制其发育的基因 | 第18-23页 |
| ·花粉囊早期各组织的分化 | 第18-20页 |
| ·拟南芥中调控孢原细胞分化和花粉囊形成的基因 | 第20-23页 |
| ·绒毡层细胞的结构与功能 | 第23-27页 |
| ·绒毡层组织的结构与功能 | 第23-24页 |
| ·绒毡层细胞PCD与雄性不育的关系 | 第24-25页 |
| ·孢子体和配子体组织互作中的基因的功能(如胼胝质酶一类) | 第25-27页 |
| ·减数分裂过程中基因的功能 | 第27-28页 |
| ·雄配子体发育过程中的基因功能 | 第28-34页 |
| ·雄性配子体发育的过程 | 第28-29页 |
| ·雄配子体中基因的表达 | 第29-34页 |
| ·调控不对称分裂和雄性生殖系形成的基因 | 第30-32页 |
| ·控制精细胞分裂的基因 | 第32-34页 |
| ·小孢子母细胞发育到成熟花粉粒的过程 | 第34-36页 |
| ·花粉囊开裂的过程以及分子调控机理 | 第36-39页 |
| ·甘蓝型油菜细胞核雄性不育的细胞学特征和分子机理研究 | 第39-40页 |
| ·植物基因功能研究的方法 | 第40-41页 |
| ·甘蓝型油菜遗传转化的研究现状 | 第41-42页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第42-43页 |
| 2 甘蓝型油菜细胞核雄性不育花药败育的细胞学研究 | 第43-65页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·石蜡切片和半薄切片的制备和观察 | 第43-44页 |
| ·透射电镜样品制备和观察 | 第44页 |
| ·扫描电镜样品制备和观察 | 第44页 |
| ·胼胝质染色 | 第44页 |
| ·TUNEL Assay | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-61页 |
| ·隐性细胞核雄性不育材料9012A的败育过程 | 第45-57页 |
| ·隐性细胞核雄性不育材料9012A和可育材料9012B的花粉囊发育过程比较 | 第45-50页 |
| ·扫描电镜和透射电镜对可育花粉囊和不育花粉囊的观察 | 第50-56页 |
| ·不育材料9012A花粉囊的PCD检测 | 第56-57页 |
| ·显性细胞核雄性不育败育的形态学观察 | 第57-61页 |
| ·光学显微镜下对显性细胞核雄性不育的花粉囊发育过程的观察 | 第57-58页 |
| ·透射电镜下比较Rs1046A和B的花粉囊发育 | 第58-61页 |
| ·讨论 | 第61-65页 |
| ·9012A和Rs1046A花药败育的原因和主要特征 | 第61-62页 |
| ·花粉囊的周壁组织和花粉母细胞分化的协调作用 | 第62页 |
| ·隐性细胞核雄性不育9012A与花粉囊组织的提前PCD相关 | 第62-63页 |
| ·9012A绒毡层细胞的液泡化与四分体降解的联系 | 第63-64页 |
| ·9012A绒毡层细胞的命运改变 | 第64-65页 |
| 3 雄性不育相关基因BnQRT3和BnATA20基因的克隆与分析 | 第65-83页 |
| ·材料和方法 | 第66-70页 |
| ·植物材料和试剂 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-70页 |
| ·基因组DNA的提取,总RNA的提取以及逆转录合成单链cDNA | 第66-67页 |
| ·引物设计和PCR扩增 | 第67-70页 |
| ·BnQRT3基因全长和全长cDNA序列的获得 | 第67-69页 |
| ·BnATA20基因的全长和全长cDNA的获得 | 第69-70页 |
| ·序列分析的相关生物信息学网站 | 第70页 |
| ·基因表达水平研究 | 第70页 |
| ·结果与分析 | 第70-83页 |
| ·BnQRT3基因的全长序列的克隆和表达分析 | 第70-77页 |
| ·BnQRT3基因的全长序列的克隆和分析 | 第70-74页 |
| ·BnQRT3基因的时空表达特征 | 第74-77页 |
| ·BnATA20基因的克隆和表达分析 | 第77-83页 |
| ·BnATA20基因的克隆和序列分析 | 第77-80页 |
| ·BnATA20基因的时空表达模式分析 | 第80-83页 |
| 4 BnQRT3基因的反义抑制,RNAi表达载体以及启动子表达载体对拟南芥和油菜的遗传转化 | 第83-113页 |
| ·材料 | 第83-84页 |
| ·材料和试剂 | 第83页 |
| ·载体和菌种 | 第83页 |
| ·转化拟南芥和甘蓝型油菜使用的培养基 | 第83-84页 |
| ·实验方法 | 第84-91页 |
| ·载体构建 | 第84-87页 |
| ·BnQRT3反义抑制载体的构建 | 第84-85页 |
| ·RNAi载体的构建 | 第85-86页 |
| ·BnQRT3启动子载体的构建 | 第86-87页 |
| ·载体质粒转化以及鉴定 | 第87-88页 |
| ·拟南芥的遗传转化 | 第88-89页 |
| ·甘蓝型油菜下胚轴转化 | 第89页 |
| ·阳性单株的检测 | 第89-90页 |
| ·阳性植株育性的鉴定 | 第90页 |
| ·GUS表达载体转化后的组织染色 | 第90-91页 |
| ·结果与分析 | 第91-110页 |
| ·BnQRT3基因反义表达载体和RNAi载体对拟南芥的转化 | 第91-99页 |
| ·转基因阳性植株的鉴定 | 第91-93页 |
| ·拟南芥T1代转化植株的表达分析和表型观察 | 第93-99页 |
| ·BnQRT3基因反义表达载体和RNAi载体对甘蓝型油菜的转化 | 第99-106页 |
| ·BnQRT3基因抑制载体转化得到的阳性苗的PCR和表型鉴定 | 第99-102页 |
| ·对表现为不育的植株的雄蕊,花粉的活力和受精观察 | 第102-105页 |
| ·通过石蜡切片和透射电镜对彻底败育的花药观察 | 第105-106页 |
| ·BnQRT3基因的启动子表达载体对拟南芥和甘蓝型油菜的遗传转化 | 第106-110页 |
| ·讨论 | 第110-113页 |
| 5 BnATA20基因反义抑制表达载体对甘蓝型油菜的转化以及启动子的表达检测 | 第113-121页 |
| ·实验材料和方法 | 第113-115页 |
| ·材料 | 第113-114页 |
| ·方法 | 第114-115页 |
| ·结果与分析 | 第115-119页 |
| ·BnATA20基因构建的启动子载体转化甘蓝型油菜的GUS染色观察 | 第115-116页 |
| ·BnATA20基因构建的反义抑制载体转化甘蓝型油菜以及转化植株的筛选 | 第116-118页 |
| ·BnQRT3基因和BnATA20基因在雄性不育代谢网络中的关系 | 第118-119页 |
| ·讨论 | 第119-121页 |
| 6 总结与展望 | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-143页 |
| 致谢 | 第143-145页 |
| 附录 | 第145-150页 |
| 附录A | 第145-150页 |
| 附录B | 第150页 |
