| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 J蛋白研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 J蛋白的结构与分类 | 第12-13页 |
| 1.1.2 J蛋白的命名 | 第13页 |
| 1.1.3 J蛋白在植物细胞中的分布 | 第13页 |
| 1.1.4 J蛋白作用机制 | 第13页 |
| 1.1.5 拟南芥中J蛋白的研究概况 | 第13-15页 |
| 1.1.5.1 J蛋白在叶绿体中的作用 | 第13-14页 |
| 1.1.5.2 J蛋白抗逆应激及参与信号转导的作用 | 第14页 |
| 1.1.5.3 J3蛋白在拟南芥中的研究概况 | 第14-15页 |
| 1.2 植物开花研究概况 | 第15-16页 |
| 1.3 竹类植物开花研究概况 | 第16页 |
| 1.4 蛋白互作研究技术的研究概述 | 第16-17页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第17-19页 |
| 2 雷竹PvJ3基因克隆 | 第19-31页 |
| 2.1 材料及试剂 | 第19页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 菌种和载体 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-25页 |
| 2.2.1 J3同源基因引物设计 | 第19-20页 |
| 2.2.2 RNA提取 | 第20页 |
| 2.2.3 cDNA的合成 | 第20-21页 |
| 2.2.4 J3同源基因引物设计 | 第21页 |
| 2.2.5 J3同源基因片段扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.6 目标电泳条带回收纯化 | 第22页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态制备(CaCl2法) | 第22-23页 |
| 2.2.8 回收片段与克隆载体连接及转化 | 第23页 |
| 2.2.9 阳性克隆筛选、菌检及测序 | 第23-24页 |
| 2.2.10 目的条带序列确定 | 第24-25页 |
| 2.2.11 PvJ3基因序列的生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-30页 |
| 2.3.1 雷竹总RNA提取结果 | 第25页 |
| 2.3.3 雷竹J3同源基因测序结果与分析 | 第25-30页 |
| 2.4 小结讨论 | 第30-31页 |
| 3 雷竹PvJ3基因亚细胞定位 | 第31-36页 |
| 3.1 材料与方法 | 第31页 |
| 3.1.1 酶和生化试剂 | 第31页 |
| 3.1.2 菌种和载体 | 第31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-34页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第31页 |
| 3.2.2 目的基因片段扩增 | 第31-32页 |
| 3.2.3 电泳条带回收纯化 | 第32页 |
| 3.2.4 回收片段与克隆载体连接及转化 | 第32页 |
| 3.2.5 质粒提取 | 第32页 |
| 3.2.6 亚细胞定位载体构建 | 第32-33页 |
| 3.2.7 基因枪法转化洋葱表皮 | 第33-34页 |
| 3.3 亚细胞定位结果与分析 | 第34页 |
| 3.4 小结讨论 | 第34-36页 |
| 4 雷竹PvJ3基因与开花关键基因的互作研究 | 第36-50页 |
| 4.1 材料及试剂 | 第36页 |
| 4.1.1 酶和生化试剂 | 第36页 |
| 4.1.2 菌种和载体 | 第36页 |
| 4.2 实验方法 | 第36-41页 |
| 4.2.1 酵母双杂交验证相互作用 | 第36-39页 |
| 4.2.1.1 酵母双杂交引物设计 | 第36-37页 |
| 4.2.1.2 酵母双杂交载体构建 | 第37页 |
| 4.2.1.3 制备酵母感受态 | 第37-38页 |
| 4.2.1.4 酵母转化 | 第38页 |
| 4.2.1.5 阳性单克隆菌检 | 第38页 |
| 4.2.1.6 重组载体自激活检测 | 第38页 |
| 4.2.1.7 PvJ3基因的酵母双杂交实验 | 第38-39页 |
| 4.2.2 双分子荧光互补技术(BiFC)验证互作 | 第39页 |
| 4.2.2.1 BiFC引物设计 | 第39页 |
| 4.2.2.2 BiFC载体构建 | 第39页 |
| 4.2.2.3 基因枪法转化洋葱表皮 | 第39页 |
| 4.2.3 雷竹中开花相关基因的表达量分析 | 第39-41页 |
| 4.2.3.1 RNA提取 | 第39-40页 |
| 4.2.3.2 cDNA合成 | 第40页 |
| 4.2.3.3 定量引物设计及筛选 | 第40-41页 |
| 4.2.3.4 Realtime-PCR扩增 | 第41页 |
| 4.3 结果与分析 | 第41-48页 |
| 4.3.1 酵母双杂实验结果 | 第41-44页 |
| 4.3.1.1 重组载体自激活检测结果 | 第41-42页 |
| 4.3.1.2 PvJ3基因与开花关键基因酵母双杂交实验结果 | 第42-44页 |
| 4.3.2 双分子荧光互补实验结果 | 第44-45页 |
| 4.3.3 雷竹中开花相关基因的表达量分析结果 | 第45-48页 |
| 4.4 小结讨论 | 第48-50页 |
| 5 雷竹PvJ3基因功能研究 | 第50-59页 |
| 5.1 材料及试剂 | 第50页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第50页 |
| 5.1.2 酶和生化试剂 | 第50页 |
| 5.1.3 菌种和载体 | 第50页 |
| 5.2 实验方法 | 第50-54页 |
| 5.2.1 引物设计 | 第50页 |
| 5.2.2 pC1301-PvJ3植物双元表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 5.2.3 农杆菌(GV3101)感受态细胞的制备 | 第51页 |
| 5.2.4 pC1301-PvJ3转化农杆菌感受态细胞(热转化法) | 第51页 |
| 5.2.5 阳性单克隆菌检 | 第51-52页 |
| 5.2.6 拟南芥的遗传转化 | 第52页 |
| 5.2.6.1 拟南芥的种植 | 第52页 |
| 5.2.6.2 农杆菌侵染拟南芥花序 | 第52页 |
| 5.2.7 阳性植株的筛选 | 第52-54页 |
| 5.2.7.1 DNA提取及鉴定 | 第53页 |
| 5.2.7.2 GUS染色鉴定 | 第53-54页 |
| 5.2.8 转基因纯合子的获得 | 第54页 |
| 5.3 实验结果 | 第54-57页 |
| 5.3.1 突变体植株的鉴定及表性统计 | 第54-55页 |
| 5.3.2 转基因阳性植株的鉴定结果 | 第55-57页 |
| 5.3.3 转基因植株的表性统计结果 | 第57页 |
| 5.4 小结讨论 | 第57-59页 |
| 6 结论与讨论 | 第59-61页 |
| 7 展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 个人简介 | 第68页 |
| 发表学术论文 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
