| 摘要 | 第9-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 干扰素概况 | 第12-14页 |
| 1.1.1 干扰素的来源 | 第12页 |
| 1.1.2 干扰素的分类 | 第12页 |
| 1.1.3 IFN-α家族概述 | 第12-13页 |
| 1.1.4 IFN-τ家族概述 | 第13-14页 |
| 1.1.5 干扰素应用 | 第14页 |
| 1.2 免疫球蛋白概况 | 第14-15页 |
| 1.2.1 免疫球蛋白结构及分类 | 第14页 |
| 1.2.2 免疫球蛋白G结构特点及生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.2.3 免疫球蛋白G应用 | 第15页 |
| 1.3 人工修饰干扰素与干扰素融合蛋白 | 第15-17页 |
| 1.3.1 长效干扰素 | 第15-16页 |
| 1.3.2 杂合干扰素 | 第16-17页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-33页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 质粒、宿主菌、动物 | 第19页 |
| 2.1.2 细胞、病毒、血清 | 第19页 |
| 2.1.3 抗体、试剂、仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-33页 |
| 2.2.1 三种干扰素融合蛋白实验设计 | 第20-22页 |
| 2.2.2 牛IgG恒定区的克隆 | 第22-23页 |
| 2.2.3 干扰素融合蛋白原核表达载体的构建 | 第23-28页 |
| 2.2.4 干扰素融合蛋白表达及纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.5 BoIFNα、BoIFNα/τ多克隆抗体制备及Western Blot鉴定 | 第29页 |
| 2.2.6 干扰素融合蛋白抗病毒活性测定 | 第29-31页 |
| 2.2.7 干扰素融合蛋白理化性质测定 | 第31页 |
| 2.2.8 干扰素融合蛋白细胞毒性测定 | 第31页 |
| 2.2.9 干扰素融合蛋白体外半衰期测定 | 第31-32页 |
| 2.2.10 干扰素融合蛋白体内半衰期测定 | 第32页 |
| 2.2.11 统计分析 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-51页 |
| 3.1 牛IgG恒定区的克隆 | 第33-34页 |
| 3.1.1 牛IgG恒定区的PCR扩增 | 第33页 |
| 3.1.2 重组质粒pMD18-T-BoIgCγ的构建 | 第33-34页 |
| 3.1.3 BoIgCγ基因的序列分析 | 第34页 |
| 3.2 干扰素融合蛋白原核表达载体的构建 | 第34-41页 |
| 3.2.1 pET30a-BoIFNα原核表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.2.2 pET32a-BoIgCγ原核表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.2.3 pET30a-BoIFNα-IgCγ原核表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.2.4 pET32a-BoIFNα/τ原核表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.2.5 pET32a-BoIFNα/τ-IgCγ原核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.2.6 pET30a-BoIFNα-IgγFc原核表达载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.3 干扰素融合蛋白表达及纯化 | 第41-42页 |
| 3.4 BoIFNα、BoIFNα/τ多克隆抗体制备及Western Blot鉴定 | 第42-43页 |
| 3.5 干扰素融合蛋白抗病毒活性分析 | 第43-44页 |
| 3.5.1 干扰素融合蛋白在不同细胞上抗VSV活性测定 | 第43-44页 |
| 3.5.2 干扰素融合蛋白抗牛源病毒活性测定 | 第44页 |
| 3.6 干扰素融合蛋白理化性质分析 | 第44-46页 |
| 3.6.1 胰酶敏感性测定 | 第44页 |
| 3.6.2 酸碱敏感性测定 | 第44-45页 |
| 3.6.3 温度敏感性测定 | 第45-46页 |
| 3.7 干扰素融合蛋白细胞毒性分析 | 第46-47页 |
| 3.8 干扰素融合蛋白体外半衰期分析 | 第47-49页 |
| 3.8.1 BALB/c小鼠50%血浆稳定性测定 | 第47-48页 |
| 3.8.2 SD大鼠50%血浆稳定性测定 | 第48页 |
| 3.8.3 牛50%血浆稳定性测定 | 第48-49页 |
| 3.9 体内血浆剩余干扰素活性分析 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| 4.1 重组干扰素在大肠杆菌中的表达 | 第51页 |
| 4.2 干扰素融合蛋白的研究 | 第51页 |
| 4.3 三种干扰素融合蛋白理化性质 | 第51-52页 |
| 4.4 三种干扰素融合蛋白抗病毒活性 | 第52页 |
| 4.5 三种干扰素融合蛋白细胞毒性测定 | 第52-53页 |
| 4.6 三种干扰素融合蛋白半衰期测定 | 第53页 |
| 4.7 干扰素融合蛋白应用前景 | 第53-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
