| 致谢 | 第4-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| 缩略词 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-34页 |
| 1.1 抗逆相关的转录因子研究进展 | 第15-25页 |
| 1.1.1 转录因子的概述 | 第15-19页 |
| 1.1.2 抗逆相关转录因子研究进展 | 第19-25页 |
| 1.2 ERF类转录因子的研究进展 | 第25-28页 |
| 1.2.1 ERFs转录因子的结构特征 | 第25-26页 |
| 1.2.2 ERFs转录因子在非生物胁迫中的作用 | 第26-28页 |
| 1.2.3 ERF转录因子在其它方面的作用 | 第28页 |
| 1.3 植物对逆境胁迫应答的相关研究 | 第28-32页 |
| 1.3.1 植物对逆境胁迫应答机制 | 第29页 |
| 1.3.2 植物对逆境胁迫的激素应答途径 | 第29-32页 |
| 1.3.2.1 乙烯信号传导途径 | 第30-31页 |
| 1.3.2.2 ABA信号转导途径 | 第31-32页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第32-34页 |
| 第二章 玉米ZmERF1及其启动子的克隆与序列分析 | 第34-48页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第34-36页 |
| 2.1.1 田间材料 | 第34页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第34页 |
| 2.1.3 试验耗材、试剂 | 第34页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第34-35页 |
| 2.1.5 培养基、常用缓冲液、试剂的配制 | 第35页 |
| 2.1.6 ZmERF1基因及启动子的克隆引物 | 第35-36页 |
| 2.2 试验方法 | 第36-42页 |
| 2.2.1 模板的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.2 ZmERF1基因cDNA获得 | 第37-38页 |
| 2.2.3 ZmERF1基因启动子的获得 | 第38页 |
| 2.2.4 目的片段的扩增及回收 | 第38页 |
| 2.2.5 目的片段与T载体的连接 | 第38-39页 |
| 2.2.6 大肠杆菌DH5α 热激感受态的制备 | 第39页 |
| 2.2.7 连接产物的转化大肠杆菌 | 第39页 |
| 2.2.8 提取大肠杆菌质粒DNA | 第39-40页 |
| 2.2.9 检测大肠杆菌质粒DNA | 第40页 |
| 2.2.10 ZmERF1蛋白结构域的预测分析 | 第40-41页 |
| 2.2.11 系统进化分析 | 第41页 |
| 2.2.12 AP2保守结构域的比对 | 第41页 |
| 2.2.13 启动子序列分析 | 第41-42页 |
| 2.3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 2.3.1 玉米ZmERF1基因的cDNA克隆及其序列分析 | 第42-45页 |
| 2.3.1.1 玉米ZmERF1基因的cDNA克隆 | 第42页 |
| 2.3.1.2 玉米ZmERF1基因的序列分析 | 第42-45页 |
| 2.3.2 玉米ZmERF1启动子克隆及其序列分析 | 第45-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 玉米ZmERF1在籽粒发育和逆境胁迫中的功能分析 | 第48-62页 |
| 3.1 材料与方法 | 第48-55页 |
| 3.1.1 材料 | 第48-50页 |
| 3.1.1.1 玉米材料 | 第48页 |
| 3.1.1.2 菌株和质粒 | 第48页 |
| 3.1.1.3 试验耗材、试剂 | 第48-49页 |
| 3.1.1.4 仪器与设备 | 第49页 |
| 3.1.1.5 培养基、常用缓冲液、试剂的配制 | 第49-50页 |
| 3.1.1.6 引物 | 第50页 |
| 3.1.2 方法 | 第50-55页 |
| 3.1.2.1 不同激素和胁迫处理方法 | 第50-51页 |
| 3.1.2.2 ZmERF1原核表达 | 第51页 |
| 3.1.2.3 不同发育时期N04胚乳总蛋白的提取 | 第51-52页 |
| 3.1.2.4 重组蛋白及总蛋白SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第52-53页 |
| 3.1.2.5 重组蛋白及总蛋白Western Blot分析 | 第53-54页 |
| 3.1.2.6 不同激素和胁迫处理下玉米苗叶片和根RNA提取、纯化及cDNA合成 | 第54页 |
| 3.1.2.7 ZmERF1定量表达分析 | 第54-55页 |
| 3.1.2.8 玉米自交系N04籽粒不同发育时期乙烯释放率 | 第55页 |
| 3.2 结果与分析 | 第55-59页 |
| 3.2.1 原核表达ZmERF1蛋白的Western Blot分析 | 第55-56页 |
| 3.2.2 不同发育时期胚乳中ZmERF1的表达特征 | 第56页 |
| 3.2.3 不同发育时期胚乳中ZmERF1蛋白的Western Blot | 第56-57页 |
| 3.2.4 玉米自交系N04不同发育时期籽粒的乙烯释放率 | 第57页 |
| 3.2.5 ZmERF1基因在不同胁迫处理及不同激素下的表达分析 | 第57-59页 |
| 3.3 讨论 | 第59-62页 |
| 第四章 玉米ZmERF1亚细胞定位、转录活性和GCC-box绑定活性分析 | 第62-75页 |
| 4.1 ZmERF1的亚细胞定位 | 第62-64页 |
| 4.1.1 材料 | 第62-63页 |
| 4.1.1.1 侵染材料 | 第62页 |
| 4.1.1.2 菌株和质粒 | 第62页 |
| 4.1.1.3 试验耗材、试剂 | 第62页 |
| 4.1.1.4 仪器与设备 | 第62页 |
| 4.1.1.5 培养基和常用试剂配制 | 第62-63页 |
| 4.1.2 方法 | 第63-64页 |
| 4.1.2.1 亚细胞定位载体pSuper-ZmERF1-GFP构建 | 第63页 |
| 4.1.2.2 农杆菌热激感受态细胞制备 | 第63页 |
| 4.1.2.3 冻融法转化农杆菌EHA105感受态细胞 | 第63-64页 |
| 4.1.2.4 农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞 | 第64页 |
| 4.1.2.5 ZmERF1核定位信号肽及亚细胞定位预测 | 第64页 |
| 4.1.2.6 ZmERF1亚细胞定位载体构建引物 | 第64页 |
| 4.2 ZmERF1蛋白的转录活性及GCC-box绑定活性分析 | 第64-69页 |
| 4.2.1 材料 | 第64-67页 |
| 4.2.1.1 载体及菌株 | 第64-65页 |
| 4.2.1.2 主要试剂 | 第65页 |
| 4.2.1.3 主要仪器设备 | 第65页 |
| 4.2.1.4 培养基及主要试剂配制 | 第65-66页 |
| 4.2.1.5 引物 | 第66-67页 |
| 4.2.2 方法 | 第67-69页 |
| 4.2.2.1 酵母单、双杂交载体构建 | 第67页 |
| 4.2.2.2 酵母感受态细胞制备及其热激转化 | 第67-68页 |
| 4.2.2.3 酵母双杂交毒性实验及转录自激活实验 | 第68页 |
| 4.2.2.4 酵母单杂交GCC及mGCC-pAbAi诱饵载体构建及诱饵酵母菌生成 | 第68-69页 |
| 4.3 结果与分析 | 第69-74页 |
| 4.3.1 ZmERF1的NIL及亚细胞定位预测 | 第69-70页 |
| 4.3.2 亚细胞定位载体的构建及转化农杆菌EHA105 | 第70页 |
| 4.3.3 根癌农杆菌介导ZmERF1转化洋葱表皮细胞 | 第70-71页 |
| 4.3.4 pGADT7-ZmERF1、pGBKT7-ZmERF1载体构建 | 第71页 |
| 4.3.5 pGBKT7-ZmERF1酵母毒性实验 | 第71-72页 |
| 4.3.6 pGBKT7-ZmERF1在酵母菌株Y2HGold转录激活活性 | 第72-73页 |
| 4.3.7 ZmERF1的GCC绑定活性 | 第73-74页 |
| 4.4 讨论 | 第74-75页 |
| 第五章 玉米ZmERF1转化拟南芥的功能分析 | 第75-88页 |
| 5.1 材料与方法 | 第75-79页 |
| 5.1.1 材料 | 第75-77页 |
| 5.1.1.1 拟南芥种植 | 第75页 |
| 5.1.1.2 菌株和质粒 | 第75页 |
| 5.1.1.3 酶类和试剂 | 第75-76页 |
| 5.1.1.4 试剂及培养基配制 | 第76页 |
| 5.1.1.5 引物 | 第76-77页 |
| 5.1.2 方法 | 第77-79页 |
| 5.1.2.1 拟南芥转基因植株获得 | 第77-78页 |
| 5.1.2.2 转 35S::ZmERF1基因拟南芥的耐盐和耐渗透指标分析 | 第78-79页 |
| 5.1.2.3 转ZmERF1promoter::GUS fusions拟南芥的组织化学分析 | 第79页 |
| 5.2 结果与分析 | 第79-86页 |
| 5.2.1 拟南芥异源表达ZmERF1功能研究 | 第79-84页 |
| 5.2.1.1 拟南芥ZmERF1过表达载体构建 | 第79页 |
| 5.2.1.2 转基因拟南芥植株的获得 | 第79-81页 |
| 5.2.1.3 转 35S::ZmERF1拟南芥的抗盐性分析 | 第81-82页 |
| 5.2.1.4 转 35S::ZmERF1拟南芥的高渗胁迫分析 | 第82-83页 |
| 5.2.1.5 转 35S::ZmERF1拟南芥的高温胁迫分析 | 第83-84页 |
| 5.2.1.6 转 35S::ZmERF1拟南芥相关抗性基因的表达分析 | 第84页 |
| 5.2.1.7 转 35S::ZmERF1拟南芥ABA和乙烯合成基因在的表达分析 | 第84页 |
| 5.2.2 转ZmERF1promoter::GUS fusions的拟南芥研究 | 第84-86页 |
| 5.2.2.1 拟南芥ZmERF1promoter::GUS过表达载体构建 | 第84-85页 |
| 5.2.2.2 转基因拟南芥植株获得 | 第85-86页 |
| 5.2.2.3 GUS染色分析 | 第86页 |
| 5.3 讨论 | 第86-88页 |
| 第六章 玉米ZmEIL1基因的克隆与功能分析 | 第88-98页 |
| 6.1 实验材料和方法 | 第88-89页 |
| 6.1.1 田间材料 | 第88页 |
| 6.1.2 菌株和质粒 | 第88页 |
| 6.1.3 试验耗材、试剂及培养基 | 第88页 |
| 6.1.4 仪器与设备 | 第88页 |
| 6.1.5 ZmEIL1基因克隆及定量引物 | 第88-89页 |
| 6.2 试验方法 | 第89-90页 |
| 6.2.1 模板制备 | 第89页 |
| 6.2.2 ZmEIL1基因扩增及回收 | 第89页 |
| 6.2.3 目的片段与T载体连接 | 第89页 |
| 6.2.4 大肠杆菌的制备与转化 | 第89页 |
| 6.2.5 大肠杆菌质粒提取与测序检测 | 第89-90页 |
| 6.2.6 ZmEIL1氨基酸序列分析 | 第90页 |
| 6.2.7 系统进化分析 | 第90页 |
| 6.2.8 ZmEIL1、AtEIN3和AtEIL1荧光定量PCR | 第90页 |
| 6.2.9 ZmEIL1转录激活区及与ZmERF1的互作分析 | 第90页 |
| 6.3 结果与分析 | 第90-96页 |
| 6.3.1 玉米自交系N04与丹232中ZmEIL1基因克隆与序列分析 | 第90-93页 |
| 6.3.2 乙烯利和 1-MCP处理下玉米自交系N04幼苗叶与根中的ZmEIL1表达特征 | 第93-94页 |
| 6.3.3 自交系N04和丹232胚乳与果皮发育过程中ZmEIL1的表达特征 | 第94-95页 |
| 6.3.4 pGBKT7-ZmEIL1在酵母菌株Y2HGold的转录激活活性 | 第95-96页 |
| 6.3.5 ZmEIL1与ZmERF1的互作 | 第96页 |
| 6.4 讨论 | 第96-98页 |
| 第七章 主要结论 | 第98-100页 |
| 7.1 ZmERF1的克隆与序列分析 | 第98页 |
| 7.2 ZmERF1在不同发育时期籽粒中表达模式 | 第98页 |
| 7.3 非生物胁迫下ZmERF1基因的表达模式 | 第98页 |
| 7.4 ZmERF1蛋白的功能分析 | 第98-99页 |
| 7.5 ZmERF1启动子序列的克隆分析 | 第99页 |
| 7.6 ZmERF1基因的功能验证 | 第99页 |
| 7.7 ZmEIL1的克隆与功能分析 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-115页 |
| 附录 1 Hogland营养液 | 第115-116页 |
| 附录 2 作者简介 | 第116-117页 |
| ABSTRACT | 第117-119页 |
