摘要 | 第8-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
第一章 前言 | 第11-15页 |
1.1 自身免疫性疾病与Gαq | 第11-12页 |
1.2 组蛋白乙酰化和基因表达调控 | 第12-15页 |
第二章 实验材料与方法 | 第15-35页 |
2.1 实验材料 | 第15-18页 |
2.1.1 实验细胞 | 第15页 |
2.1.2 主要的试剂 | 第15-16页 |
2.1.3 主要的仪器 | 第16-17页 |
2.1.4 主要的溶液的配制 | 第17-18页 |
2.2 实验方法 | 第18-35页 |
2.2.1 细胞培养 | 第18-19页 |
2.2.2 细胞的冻存和复苏 | 第19页 |
2.2.3 细胞加药刺激 | 第19页 |
2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第19-21页 |
2.2.5 从提取mRNA到实时定量PCR分析 | 第21-23页 |
2.2.6 蛋白印迹分析Gaq、 GATA-1蛋白水平的表达 | 第23-26页 |
2.2.7 流式检测细胞凋亡 | 第26-27页 |
2.2.8 免疫沉淀检测TSA处理后GATA-1表达 | 第27页 |
2.2.9 染色质免疫沉淀实验(CHIP)证明GATA-1作用于GNAQ启动子区 | 第27-31页 |
2.2.10 凝胶迁移实验(EMSA)证明GATA-1与GNAQ启动子区结合 | 第31-35页 |
第三章 实验结果 | 第35-47页 |
3.1 293T 细胞中可表达Gαq | 第35页 |
3.2 TSA对293T细胞Gαq mRNA水平的影响 | 第35-36页 |
3.3 TSA对293T细胞Gαq蛋白水平的影响 | 第36页 |
3.4 浓度为0-200nM的TSA对293T细胞的凋亡无影响 | 第36-37页 |
3.5 HDACs家族成员在293T细胞中的表达 | 第37-38页 |
3.6 TSA处理能够明显提高细胞内组蛋白H3和H4的乙酰化水平 | 第38页 |
3.7 GNAQ的启动子序列及转录因子的筛选 | 第38-40页 |
3.8 TSA对293T细胞GATA-1 mRNA水平的影响 | 第40-41页 |
3.9 TSA对293T细胞GATA-1蛋白水平的影响 | 第41-42页 |
3.10 免疫沉淀验证TSA处理后GATA-1的表达升高 | 第42-43页 |
3.11 CHIP验证GNAQ基因启动子区(-607~-411)为GATA-1结合位点 | 第43-44页 |
3.12 EMSA验证GATA-1与GNAQ基因启动子区(-569~-559)结合 | 第44-47页 |
第四章 讨论 | 第47-51页 |
附录 | 第51-53页 |
综述 | 第53-63页 |
参考文献 | 第63-67页 |
致谢 | 第67-68页 |