| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一部分 | 第12-20页 |
| 文献综述 | 第13-20页 |
| 1 李斯特菌概述 | 第13-14页 |
| 2 单增李斯特菌感染机制 | 第14-15页 |
| 3 氨基肽酶概述 | 第15-17页 |
| 3.1 氨基肽酶功能 | 第16页 |
| 3.2 单增李斯特菌氨基肽酶 | 第16-17页 |
| 4 细菌鞭毛与分泌系统 | 第17-20页 |
| 4.1 细菌鞭毛的结构及组成 | 第18页 |
| 4.2 单增李斯特菌鞭毛的结构及组成 | 第18-19页 |
| 4.3 单增李斯特菌分泌系统结构与功能 | 第19-20页 |
| 第二部分 试验研究 | 第20-75页 |
| 第一章 单增李斯特菌氨基肽酶Lmo1711酶学功能研究 | 第21-46页 |
| 1 材料与方法 | 第21-36页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第21-22页 |
| 1.2 试剂订购 | 第22-23页 |
| 1.3 试验仪器 | 第23页 |
| 1.4 试剂配制 | 第23-25页 |
| 1.5 E.coli感受态细胞制备 | 第25-26页 |
| 1.6 Lmo1711重组原核表达质粒的构建 | 第26-29页 |
| 1.7 Lmo1711重组蛋白表达纯化与多抗制备 | 第29-30页 |
| 1.8 Lmo1711酶活性分析 | 第30-32页 |
| 1.9 酶活动力学分析 | 第32-33页 |
| 1.10 Lmo1711氨基酸突变位点重组表达质粒构建 | 第33-34页 |
| 1.11 Lmo1711氨基酸突变位点重组蛋白表达与纯化 | 第34页 |
| 1.12 Lmo1711细菌内定位分析 | 第34-35页 |
| 1.13 Lmo1711生物信息学分析 | 第35-36页 |
| 2 试验结果 | 第36-44页 |
| 2.1 EGD-eLmo1711生物信息学分析 | 第36-38页 |
| 2.2 Lmo1711阳性重组质粒验证 | 第38-39页 |
| 2.3 Lmo1711重组蛋白的表达和纯化 | 第39页 |
| 2.4 Lmo1711重组蛋白多克隆抗体的制备 | 第39页 |
| 2.5 Lmo1711氨基酸突变位点重组蛋白表达与纯化 | 第39-40页 |
| 2.6 Lmo1711氨基肽酶底物特异性 | 第40-41页 |
| 2.7 Lmo1711的酶活动力学参数 | 第41-42页 |
| 2.8 Lmo1711酶活性金属离子依赖性 | 第42页 |
| 2.9 Lmo1711氨基酸保守位点对酶活性的影响 | 第42-44页 |
| 2.10 Lmo1711在李斯特菌中的定位 | 第44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 第二章 单增李斯特菌氨基肽酶Lmo1711生物学功能研究 | 第46-58页 |
| 1 材料与方法 | 第46-53页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第46页 |
| 1.2 细胞与培养条件 | 第46页 |
| 1.3 质粒、酶、试剂盒 | 第46页 |
| 1.4 试剂配制 | 第46-47页 |
| 1.5 单增李斯特菌感受态细胞的制备 | 第47页 |
| 1.6 细菌基因敲除原理 | 第47-48页 |
| 1.7 lmo1711敲除质粒的构建 | 第48-49页 |
| 1.8 lmo1711基因敲除方法 | 第49页 |
| 1.9 lmo1711回补株的构建 | 第49-50页 |
| 1.10 lmo1711缺失株体外生长能力分析 | 第50-51页 |
| 1.11 lmo1711缺失株黏附侵袭和胞内增殖试验 | 第51-52页 |
| 1.12 lmo1711突变株蚀斑试验 | 第52-53页 |
| 2 试验结果 | 第53-56页 |
| 2.1 lmo1711阳性敲除质粒与回补质粒验证 | 第53-54页 |
| 2.2 lmo1711阳性缺失株与回补株验证 | 第54页 |
| 2.3 lmo1711对单增李斯特菌体外生长能力的影响 | 第54-55页 |
| 2.4 lmo1711缺失株对上皮细胞的侵袭和胞内增殖能力分析 | 第55-56页 |
| 2.5 lmo1711缺失株胞内扩散能力分析 | 第56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 第三章 鞭毛结构蛋白FlhB的生物学功能研究 | 第58-75页 |
| 1 材料和方法 | 第58-65页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第58页 |
| 1.2 试剂配制 | 第58页 |
| 1.3 flhB突变株体外生长能力分析 | 第58页 |
| 1.4 flhB突变株体外运动性分析 | 第58-59页 |
| 1.5 flhB突变株鞭毛电镜观察 | 第59页 |
| 1.6 flhB突变株鞭毛相关基因转录水平分析 | 第59-60页 |
| 1.7 flhB突变株鞭毛相关蛋白表达水平分析 | 第60-61页 |
| 1.8 iTRAQ试验蛋白样品的制备 | 第61页 |
| 1.9 iTRAQ定量蛋白质工作流程 | 第61-63页 |
| 1.10 差异蛋白的表达纯化与多抗制备 | 第63-64页 |
| 1.11 Westernblot对部分差异蛋白的验证 | 第64-65页 |
| 2 试验结果 | 第65-72页 |
| 2.1 flhB突变株体外生长能力分析 | 第65页 |
| 2.2 flhB突变株体外运动性分析 | 第65页 |
| 2.3 flhB突变株鞭毛电镜观察 | 第65-66页 |
| 2.4 flhB突变株鞭毛相关基因转录水平分析 | 第66页 |
| 2.5 flhB突变株鞭毛相关蛋白表达水平分析 | 第66-67页 |
| 2.6 分泌型差异蛋白的统计 | 第67-71页 |
| 2.7 差异蛋白原核表达与多抗制备 | 第71页 |
| 2.8 Westernblot对差异蛋白的验证 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录I 中英文对照表 | 第84-86页 |
| 附录II 试验所需引物 | 第86-89页 |
| 个人简历 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
