| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 昆虫抗性机制的研究进展 | 第9-11页 |
| 1.1.1 穿透性的降低 | 第9-10页 |
| 1.1.2 解毒代谢作用的增强 | 第10页 |
| 1.1.3 对靶标部位的作用 | 第10-11页 |
| 1.2 RNA干扰 | 第11-13页 |
| 1.2.1 RNAi的应用 | 第12-13页 |
| 1.2.1.1 在基因功能研究中的应用 | 第12页 |
| 1.2.1.2 在昆虫抗药性研究中的应用 | 第12页 |
| 1.2.1.3 在害虫防治中的应用 | 第12-13页 |
| 1.3 基因转染技术 | 第13页 |
| 1.4 翻译控制肿瘤蛋白研究进展 | 第13-15页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第15-16页 |
| 第2章 杀虫剂对TCTP基因表达水平的影响 | 第16-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第16页 |
| 2.1.1 果蝇细胞 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要耗材和仪器 | 第16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-20页 |
| 2.2.1 TCTP对三种杀虫剂的响应 | 第16-20页 |
| 2.2.1.1 细胞传代培养 | 第16-17页 |
| 2.2.1.2 三种不同药物诱导果蝇细胞 | 第17页 |
| 2.2.1.3 提取黑腹果蝇的总RNA | 第17-18页 |
| 2.2.1.4 检测RNA浓度 | 第18页 |
| 2.2.1.5 RNA反转录成cDNA | 第18-19页 |
| 2.2.1.5 荧光定量PCR | 第19-20页 |
| 2.2.1.6 最适浓度的溴氰菊酯处理细胞不同时间 | 第20页 |
| 2.2.1.7 提取RNA,反转录cDNA与RT-PCR | 第20页 |
| 2.2.1.8 细胞毒性检测 | 第20页 |
| 2.3 结果 | 第20-24页 |
| 2.3.1 三种杀虫剂对果蝇TCTP表达水平的影响 | 第20-22页 |
| 2.3.2 溴氰菊酯诱导时程对TCTP表达水平的影响 | 第22页 |
| 2.3.3 不同浓度溴氰菊酯处理细胞的存活率 | 第22-24页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第24-25页 |
| 第3章 TCTP表达量的改变对果蝇细胞抗性的影响 | 第25-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第25页 |
| 3.1.1 果蝇Kc细胞 | 第25页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 3.1.3 主要耗材和仪器 | 第25页 |
| 3.2 实验方法 | 第25-38页 |
| 3.2.1 TCTP转染果蝇细胞 | 第25-30页 |
| 3.2.1.1 TCTP基因全长的扩增 | 第25-27页 |
| 3.2.1.2 纯化PCR产物以及测序 | 第27页 |
| 3.2.1.3 构建昆虫表达载体 | 第27-28页 |
| 3.2.1.4 目的基因的果蝇Kc细胞转染 | 第28-30页 |
| 3.2.2 重组质粒表达的鉴定 | 第30-35页 |
| 3.2.2.1 基因水平上重组质粒的表达测定 | 第30页 |
| 3.2.2.2 蛋白水平上重组质粒的表达测定 | 第30-35页 |
| 3.2.3 TCTP基因的干扰 | 第35-37页 |
| 3.2.3.1 RNA的提取和反转录 | 第35页 |
| 3.2.3.2 制备dsRNA | 第35-37页 |
| 3.2.3.3 TCTP基因干扰 | 第37页 |
| 3.2.4 TCTP基因干扰效率的的检测 | 第37页 |
| 3.2.4.1 测定基因水平的干扰效率 | 第37页 |
| 3.2.4.2 测定蛋白水平的干扰效率 | 第37页 |
| 3.2.5 细胞毒性检测 | 第37-38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-41页 |
| 3.3.1 细胞转入TCTP后基因表达水平的差异 | 第38页 |
| 3.3.2 细胞转入TCTP dsRNA后基因表达水平差异 | 第38-39页 |
| 3.3.3 细胞转染TCTP和干扰后蛋白质表达水平的差异 | 第39-40页 |
| 3.3.4 转染和干扰TCTP基因后检测细胞对溴氰菊酯的抗性水平差异 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第41-43页 |
| 第4章 抗性品系和敏感品系小菜蛾不同组织TCTP基因表达量分析 | 第43-48页 |
| 4.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.1 供试小菜蛾 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 4.1.3 主要耗材和仪器 | 第43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-45页 |
| 4.2.1 提取RNA及合成cDNA模板 | 第43-44页 |
| 4.2.1.1 解剖幼虫以及RNA的提取 | 第43-44页 |
| 4.2.1.2 RNA浓度和纯度测定 | 第44页 |
| 4.2.1.3 反转录 | 第44页 |
| 4.2.2 定量引物的设计 | 第44-45页 |
| 4.2.3 数据统计方法 | 第45页 |
| 4.3 实验结果 | 第45-47页 |
| 4.3.1 不同品系小菜蛾TCTP基因表达量 | 第45-46页 |
| 4.3.2 不同品系各组织TCTP表达量差异 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第47-48页 |
| 全文总结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-58页 |
| 在读学位期间的研究成果 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
