| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1 褐飞虱研究概况 | 第11-12页 |
| 1.1.1 褐飞虱及其危害 | 第11页 |
| 1.1.2 褐飞虱的防治 | 第11-12页 |
| 1.2 水稻齿叶矮缩病毒(RRSV)的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 RRSV特征及分类 | 第12页 |
| 1.2.2 RRSV寄主及传播介体 | 第12-13页 |
| 1.2.3 RRSV基因组及编码蛋白 | 第13-15页 |
| 1.3 酵母双杂交系统在研究中的应用 | 第15-20页 |
| 1.3.1 酵母双杂交系统的原理 | 第15-16页 |
| 1.3.2 酵母双杂交系统的优缺点 | 第16-17页 |
| 1.3.3 酵母双杂交系统在病毒学中的应用 | 第17-20页 |
| 1.4 GST pull-down技术研究进展 | 第20-21页 |
| 1.5 研究的目的及科学意义 | 第21-22页 |
| 第二章 酵母双杂交文库构建 | 第22-31页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.2.1.1 褐飞虱 | 第22页 |
| 2.2.1.2 酵母双杂交载体及菌株 | 第22页 |
| 2.2.1.3 主要实验试剂与工具 | 第22-23页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.2.1 褐飞虱总RNA提取及鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.2.2 cDNA的第一条链合成 | 第24页 |
| 2.2.2.3 cDNA的第二条链合成 | 第24-25页 |
| 2.2.2.4 双链cDNA的柱纯化 | 第25页 |
| 2.2.2.5 Y187酵母感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.2.6 酵母感受态转化及文库收集 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-29页 |
| 2.3.1 酵母双杂交文库双链cDNA的合成与纯化 | 第27-28页 |
| 2.3.2 酵母双杂交文库转化 | 第28-29页 |
| 2.3.3 酵母双杂交文库收集 | 第29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 利用RRSV Pns10筛选褐飞虱全虫文库 | 第31-45页 |
| 3.1 引言 | 第31页 |
| 3.2 材料与方法 | 第31-35页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.2.1.1 RRSV病毒 | 第31页 |
| 3.2.1.2 酵母双杂交载体及菌株 | 第31页 |
| 3.2.1.3 主要实验试剂与工具 | 第31-32页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第32-35页 |
| 3.2.2.1 cDNA的合成 | 第32页 |
| 3.2.2.2 目的基因克隆与连接 | 第32-33页 |
| 3.2.2.3 重组质粒转化Y2H Gold菌株 | 第33页 |
| 3.2.2.4 诱饵菌株检测毒性和自激活效应 | 第33页 |
| 3.2.2.5 诱饵菌株筛选酵母cDNA文库 | 第33-34页 |
| 3.2.2.6 候选互作蛋白鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.2.7 生物信息学分析 | 第35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-41页 |
| 3.3.1 诱饵载体构建 | 第35-36页 |
| 3.3.2 诱饵毒性与自激活检测 | 第36-37页 |
| 3.3.3 褐飞虱与RRSV Pns10互作蛋白的筛选 | 第37-38页 |
| 3.3.4 阳性克隆鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.5 候选互作蛋白的生物信息学分析 | 第39-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-45页 |
| 第四章 NlML与Pns10互作验证 | 第45-56页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 材料与方法 | 第45-49页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 4.2.1.1 原核表达载体及菌株 | 第45页 |
| 4.2.1.2 主要实验试剂与工具 | 第45-46页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第46-49页 |
| 4.2.2.1 序列全长获取 | 第46页 |
| 4.2.2.2 NlML基因原核表达载体的构建 | 第46页 |
| 4.2.2.3 NlML诱导表达 | 第46-47页 |
| 4.2.2.4 Western blotting验证蛋白表达 | 第47页 |
| 4.2.2.5 NlML融合蛋白大量表达及回收纯化 | 第47-48页 |
| 4.2.2.6 GST pull-down | 第48-49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-54页 |
| 4.3.1 NlML序列分析 | 第49-51页 |
| 4.3.2 原核表达载体构建 | 第51-52页 |
| 4.3.3 诱导表达 | 第52-53页 |
| 4.3.4 NlML回收及抗体制备 | 第53页 |
| 4.3.5 GST pull-down | 第53-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 NlML功能分析 | 第56-65页 |
| 5.1 引言 | 第56页 |
| 5.2 材料与方法 | 第56-59页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第56页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第56-59页 |
| 5.2.2.1 NlML表达模式分析 | 第56页 |
| 5.2.2.2 实时荧光定量PCR | 第56-57页 |
| 5.2.2.3 RNA干扰 | 第57-59页 |
| 5.2.2.3.1 双链RNA合成 | 第57-58页 |
| 5.2.2.3.2 显微注射dsRNA | 第58-59页 |
| 5.2.2.4 带毒褐飞虱病毒量测定 | 第59页 |
| 5.3 结果与分析 | 第59-63页 |
| 5.3.1 NlML表达模式分析 | 第59-61页 |
| 5.3.2 RNA干扰效果 | 第61-62页 |
| 5.3.3 NlML与病毒复制增殖 | 第62-63页 |
| 5.4 讨论 | 第63-65页 |
| 第六章 总结与展望 | 第65-67页 |
| 6.1 总结 | 第65-66页 |
| 6.2 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 在读期问发表的论文 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
