| 中文摘要 | 第3-4页 |
| 英文摘要 | 第4-5页 |
| 主要缩略词 | 第11-13页 |
| 1 绪论 | 第13-19页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-15页 |
| 1.1.1 CRIM1 蛋白 | 第13页 |
| 1.1.2 CRIM1 是癌相关蛋白的可能性探讨 | 第13-15页 |
| 1.1.3 肺癌的危害和分类 | 第15页 |
| 1.2 本文创新点 | 第15页 |
| 1.3 本文研究的目的，意义和内容 | 第15-19页 |
| 1.3.1 本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 1.3.2 本研究的主要内容 | 第16页 |
| 1.3.3 本研究的技术路线 | 第16-19页 |
| 2 A549 细胞的培养和观察 | 第19-23页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 实验材料和设备 | 第19-20页 |
| 2.2.1 细胞株 | 第19页 |
| 2.2.2 细胞培养仪器 | 第19-20页 |
| 2.2.3 细胞培养材料 | 第20页 |
| 2.2.4 相关实验材料准备 | 第20页 |
| 2.2.5 相关实验试剂配制以及材料准备 | 第20页 |
| 2.3 实验方法实验结果 | 第20-22页 |
| 2.3.1 细胞的复苏与冻存 | 第21页 |
| 2.3.2 细胞的换液和传代 | 第21-22页 |
| 2.4 细胞形态观察 | 第22页 |
| 2.5 本章小结 | 第22-23页 |
| 3 siRNA转染条件摸索以及沉默效率的确定 | 第23-39页 |
| 3.1 引言 | 第23页 |
| 3.2 实验材料准备与siRNA的合成 | 第23-25页 |
| 3.2.1 实验细胞 | 第23页 |
| 3.2.2 实验装置和仪器 | 第23-24页 |
| 3.2.3 实验材料和试剂 | 第24-25页 |
| 3.3 实验方法 | 第25-32页 |
| 3.3.1 细胞转染条件摸索 | 第25页 |
| 3.3.2 总RNA提取、检测与反转录 | 第25-27页 |
| 3.3.3 RT-PCR检测基因表达 | 第27-28页 |
| 3.3.4 总蛋白提取 | 第28页 |
| 3.3.5 蛋白含量测定 | 第28-29页 |
| 3.3.6 Western blot检测蛋白表达 | 第29-32页 |
| 3.4 实验结果 | 第32-36页 |
| 3.4.1 siRNA转染条件的选择 | 第32-33页 |
| 3.4.2 SiRNA转染后沉默效率的确定 | 第33-36页 |
| 3.5 讨论 | 第36-37页 |
| 3.6 本章小结 | 第37-39页 |
| 4 CRIM1 对A549 细胞增殖行为的影响 | 第39-45页 |
| 4.1 引言 | 第39页 |
| 4.2 实验材料和设备 | 第39-40页 |
| 4.2.1 实验细胞 | 第39页 |
| 4.2.2 实验装置与仪器 | 第39-40页 |
| 4.2.3 实验材料和试剂 | 第40页 |
| 4.2.4 相关实验试剂配制 | 第40页 |
| 4.3 实验方法 | 第40-41页 |
| 4.3.1 siRNA的转染 | 第40-41页 |
| 4.3.2 CRIM1 多肽处理A549 细胞 | 第41页 |
| 4.3.3 MTT法检测增殖 | 第41页 |
| 4.4 实验结果 | 第41-43页 |
| 4.4.1 CRIM1 的沉默对A549 细胞增殖的作用 | 第41-42页 |
| 4.4.2 CRIM1 多肽对于A549 细胞增殖的影响 | 第42-43页 |
| 4.5 讨论 | 第43页 |
| 4.6 本章小结 | 第43-45页 |
| 5 CRIM1 对A549 细胞迁移的影响 | 第45-51页 |
| 5.1 引言 | 第45页 |
| 5.2 实验材料和设备 | 第45-46页 |
| 5.2.1 实验细胞 | 第45页 |
| 5.2.2 细胞培养的装置和仪器 | 第45-46页 |
| 5.2.3 实验材料和试剂 | 第46页 |
| 5.3 实验方法 | 第46页 |
| 5.3.1 siRNA的转染后划痕 | 第46页 |
| 5.3.2 加入CRIM1 多肽并划痕 | 第46页 |
| 5.4 实验结果 | 第46-49页 |
| 5.4.1 CRIM1 的沉默抑制A549 细胞迁移 | 第46-47页 |
| 5.4.2 加入CRIM1 多肽促进A549 细胞迁移 | 第47-49页 |
| 5.5 讨论 | 第49页 |
| 5.6 本章小结 | 第49-51页 |
| 6 CRIM1 对A549 细胞粘附的影响 | 第51-57页 |
| 6.1 引言 | 第51页 |
| 6.2 实验材料和设备 | 第51-52页 |
| 6.2.1 实验细胞 | 第51页 |
| 6.2.2 细胞培养的装置和仪器 | 第51页 |
| 6.2.3 实验材料和试剂 | 第51-52页 |
| 6.2.4 相关试剂的配制 | 第52页 |
| 6.3 实验方法 | 第52-53页 |
| 6.3.1 siRNA的转染 | 第52页 |
| 6.3.2 CRIM1 多肽处理细胞 | 第52页 |
| 6.3.3 粘附分析 | 第52-53页 |
| 6.4 实验结果 | 第53-54页 |
| 6.4.1 CRIM1 的沉默抑制A549 细胞粘附 | 第53页 |
| 6.4.2 加入CRIM1 多肽促进A549 细胞粘附 | 第53-54页 |
| 6.5 讨论 | 第54-55页 |
| 6.6 本章小结 | 第55-57页 |
| 7 CRIM1 与EMT之间的关系的研究 | 第57-69页 |
| 7.1 引言 | 第57-58页 |
| 7.2 实验材料和方法 | 第58-59页 |
| 7.2.1 实验细胞 | 第58页 |
| 7.2.2 实验装置和仪器 | 第58页 |
| 7.2.3 实验材料和试剂 | 第58-59页 |
| 7.3 实验方法 | 第59-63页 |
| 7.3.1 TGFβ1 诱导EMT | 第59页 |
| 7.3.2 CRIM1 加样诱导 | 第59-60页 |
| 7.3.3 CRIM1 参与的TGFβ1 诱导 | 第60页 |
| 7.3.4 siRNA的转染 | 第60页 |
| 7.3.5 总RNA的提取、检测及反转录 | 第60页 |
| 7.3.6 RT-PCR检测基因的表达 | 第60-61页 |
| 7.3.7 q-PCR检测基因表达 | 第61-62页 |
| 7.3.8 总蛋白的提取 | 第62页 |
| 7.3.9 蛋白含量检测 | 第62页 |
| 7.3.10 Western blot检测目的蛋白表达量 | 第62-63页 |
| 7.4 实验结果 | 第63-67页 |
| 7.4.1 A549 发生EMT过程中CRIM1 表达检测 | 第63-64页 |
| 7.4.2 CRIM1 与EMT | 第64-67页 |
| 7.5 讨论 | 第67-68页 |
| 7.6 本章小结 | 第68-69页 |
| 8 CRIM1 与Hippo信号通路的关系初探 | 第69-85页 |
| 8.1 引言 | 第69-70页 |
| 8.2 实验材料和设备 | 第70-72页 |
| 8.2.1 主要仪器和设备 | 第70-71页 |
| 8.2.2 主要试剂 | 第71-72页 |
| 8.3 实验方法 | 第72-79页 |
| 8.3.1 实验准备工作 | 第72页 |
| 8.3.2 获得目的片段 | 第72-74页 |
| 8.3.3 质粒构建 | 第74-75页 |
| 8.3.4 筛选阳性菌落 | 第75-76页 |
| 8.3.5 质粒提取 | 第76页 |
| 8.3.6 质粒转染 | 第76-77页 |
| 8.3.7 目的基因表达检测 | 第77-78页 |
| 8.3.8 目的基因蛋白表达检测 | 第78-79页 |
| 8.4 实验结果 | 第79-81页 |
| 8.4.1 pcDNA3.1（+）-EGFP- YAP1 的构建 | 第79页 |
| 8.4.2 YAP1 的过表达以及相关基因和蛋白的检测 | 第79-81页 |
| 8.5 讨论 | 第81-83页 |
| 8.6 本章小结 | 第83-85页 |
| 9 结论与展望 | 第85-87页 |
| 9.1 主要结论 | 第85页 |
| 9.2 展望 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-95页 |
| 附录 | 第95页 |
| A. 作者在攻读学位期间发表的论文 | 第95页 |
| B. 作者在攻读学位期间获得的专利 | 第95页 |
