| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 第一章 绪论 | 第18-28页 |
| 1.1 幽门螺杆菌疫苗现状 | 第19-21页 |
| 1.1.1 幽门螺杆菌全菌疫苗 | 第19页 |
| 1.1.2 幽门螺杆菌亚单位疫苗 | 第19-20页 |
| 1.1.3 核酸疫苗 | 第20页 |
| 1.1.4 活载体疫苗 | 第20页 |
| 1.1.5 佐剂 | 第20-21页 |
| 1.1.6 给药方式 | 第21页 |
| 1.2 幽门螺杆菌疫苗评价的动物模型 | 第21-23页 |
| 1.2.1 灵长类动物模型 | 第21-22页 |
| 1.2.2 其他大型哺乳动物模型 | 第22页 |
| 1.2.3 大鼠模型 | 第22页 |
| 1.2.4 小鼠模型 | 第22页 |
| 1.2.5 蒙古沙鼠模型 | 第22-23页 |
| 1.2.6 转基因小鼠 | 第23页 |
| 1.3 幽门螺杆菌的黏附因子 | 第23页 |
| 1.4 外源黏附因子 | 第23-25页 |
| 1.5 幽门螺杆菌基因打靶 | 第25-26页 |
| 1.6 表面展示系统 | 第26页 |
| 1.7 幽门螺杆菌外膜蛋白 | 第26-27页 |
| 1.7.1 Lpp20 | 第26页 |
| 1.7.2 Omp18 | 第26-27页 |
| 1.8 立题依据 | 第27-28页 |
| 第二章 幽门螺杆菌基因打靶优化 | 第28-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 酶与试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 培养基及溶液 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.2.1 幽门螺杆菌的培养 | 第29-30页 |
| 2.2.2 幽门螺杆菌基因组的制备 | 第30页 |
| 2.2.3 引物序列设计 | 第30页 |
| 2.2.4 PCR扩增目的基因 | 第30-31页 |
| 2.2.5 打靶载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.6 感受态的制备 | 第32页 |
| 2.2.7 抗生素的选择 | 第32页 |
| 2.2.8 二次转涂影响 | 第32页 |
| 2.2.9 感受态浓度的影响 | 第32-33页 |
| 2.2.10 孵育时间影响 | 第33页 |
| 2.2.11 同源臂长度影响 | 第33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-41页 |
| 2.3.1 幽门螺杆菌基因敲除技术路线 | 第33-34页 |
| 2.3.2 同源臂的扩增 | 第34-35页 |
| 2.3.3 打靶载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.3.4 抗生素的选择 | 第36页 |
| 2.3.5 二次转涂的影响 | 第36-38页 |
| 2.3.6 感受态浓度影响 | 第38-39页 |
| 2.3.7 孵育时间影响 | 第39-40页 |
| 2.3.8 同源臂长度的影响 | 第40-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-44页 |
| 第三章 幽门螺杆菌基改造菌株的构建及鉴定 | 第44-68页 |
| 3.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 3.1.1 质粒与菌株 | 第44-45页 |
| 3.1.2 酶与试剂 | 第45页 |
| 3.2 试验方法 | 第45-53页 |
| 3.2.1 幽门螺杆菌的培养 | 第45-46页 |
| 3.2.2 幽门螺杆菌基因组模板的制备 | 第46页 |
| 3.2.3 S. typhimurium基因组的制备 | 第46页 |
| 3.2.4 引物序列设计 | 第46-47页 |
| 3.2.5 打靶载体构建 | 第47-48页 |
| 3.2.6 基因敲入 | 第48页 |
| 3.2.7 基因组水平验证 | 第48-49页 |
| 3.2.8 RNA水平验证 | 第49-51页 |
| 3.2.9 FimH重组表达 | 第51-52页 |
| 3.2.10 FimH多抗制备 | 第52页 |
| 3.2.11 外膜蛋白提取 | 第52页 |
| 3.2.12 外膜蛋白Western Blot | 第52页 |
| 3.2.13 外膜蛋白斑点杂交 | 第52-53页 |
| 3.3 实验结果 | 第53-64页 |
| 3.3.1 技术路线 | 第53页 |
| 3.3.2 基因敲入示意图 | 第53-54页 |
| 3.3.3 打靶载体片段扩增 | 第54-55页 |
| 3.3.4 打靶载体构建 | 第55-57页 |
| 3.3.5 基因组水平验证 | 第57-59页 |
| 3.3.6 RNA水平验证 | 第59-62页 |
| 3.3.7 FimH重组表达 | 第62页 |
| 3.3.8 FimH多抗的制备 | 第62-63页 |
| 3.3.9 Western Blot | 第63-64页 |
| 3.3.10 斑点杂交 | 第64页 |
| 3.4 讨论 | 第64-68页 |
| 第四章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者攻读学位期间发表的学术论文 | 第76-77页 |
| 作者和导师简介 | 第77-79页 |
| 附件 | 第79-80页 |