| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·福氏志贺氏菌的致病过程 | 第11-12页 |
| ·福氏志贺氏菌的Ⅲ型分泌系统(T3SS)及其效应分子 | 第12-14页 |
| ·福氏志贺氏菌染色体上的毒力相关基因 | 第14-17页 |
| ·本实验的研究思路与目的 | 第17-18页 |
| ·参考文献 | 第18-22页 |
| 第2章 福氏2a志贺氏菌2457T cobB,gtrⅡ #13突变体的构建及鉴定 | 第22-36页 |
| ·前言 | 第22-23页 |
| ·材料与方法 | 第23-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·主要化学试剂与耗材 | 第23页 |
| ·主要仪器与分析软件 | 第23-24页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增条件 | 第25页 |
| ·线性打靶DNA的构建 | 第25-26页 |
| ·目的基因的缺失 | 第26-28页 |
| ·将含λ-Red重组系统的质粒导入福氏志贺氏菌2a 2457T野生株中 | 第26-27页 |
| ·线形打靶片段的电击转化 | 第27-28页 |
| ·cobB,gtrⅡ基因缺失突变体在分子水平上的验证 | 第28页 |
| ·突变株与野生株生长状态的测定 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-34页 |
| ·长同源臂突变盒的构建 | 第29-30页 |
| ·cobB,gtrⅡ突变体的构建 | 第30-31页 |
| ·cobB,gtrⅡ突变体缺失及毒力验证 | 第31-32页 |
| ·突变株与野生株生长状态的测定 | 第32-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| ·缺失突变株的构建 | 第34-35页 |
| ·参考文献 | 第35-36页 |
| 第3章 福氏2a志贺氏菌cobB,gtrⅡ,yciD基因突变株与野生株蛋白表达谱的比较 | 第36-52页 |
| ·前言 | 第36-37页 |
| ·材料与方法 | 第37-42页 |
| ·菌株和培养条件 | 第37页 |
| ·主要化学试剂与耗材 | 第37页 |
| ·仪器与软件 | 第37-38页 |
| ·溶液配制 | 第38页 |
| ·全菌蛋白的样品制备 | 第38-39页 |
| ·△yciD∷kan外膜蛋白样品的制备 | 第39页 |
| ·双向电泳 | 第39-41页 |
| ·电泳凝胶的考马斯亮蓝染色(考染)与脱色 | 第41-42页 |
| ·图像扫描与分析 | 第42页 |
| ·蛋白差异点鉴定 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-50页 |
| ·△cobB∷kan,△gtrⅡ∷kan,△yciD∷kan与野生株全菌蛋白双向电泳的图谱比较 | 第42-47页 |
| ·△yciD∷kan与野生株外膜蛋白双向电泳的图谱比较 | 第47-49页 |
| ·△yciD∷kan差异点蛋白的MALDI-TOF/TOF质谱鉴定 | 第49-50页 |
| ·分析与讨论 | 第50-51页 |
| ·参考文献 | 第51-52页 |
| 第4章 福氏2a志贺氏菌cobB,gtrⅡ,yciD基因突变株与野生株毒力的相关性研究 | 第52-64页 |
| ·前言 | 第52-53页 |
| ·材料与溶液配制 | 第53-55页 |
| ·菌株与材料 | 第53页 |
| ·主要生化试剂与实验仪器 | 第53-54页 |
| ·溶液配制 | 第54-55页 |
| ·细胞培养溶液的配制 | 第54页 |
| ·培养基的配制 | 第54页 |
| ·麻醉剂的配制 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| ·PCR毒力检测及缺失验证 | 第55页 |
| ·野生株和突变株豚鼠角膜实验(Sereny Test)的比较 | 第55页 |
| ·竞争性侵袭HeLa细胞实验 | 第55-56页 |
| ·HeLa细胞的培养 | 第55-56页 |
| ·HeLa细胞实验 | 第56页 |
| ·小鼠肺竞争性侵袭实验 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-62页 |
| ·PCR毒力检测及缺失缺失验证 | 第57-58页 |
| ·野生株和突变株豚鼠角膜实验(Sereny Test)的比较 | 第58-60页 |
| ·△yciD:kan的HeLa细胞侵袭实验 | 第60页 |
| ·△yciD:kan小鼠肺竞争性侵袭实验 | 第60-62页 |
| ·结果与分析 | 第62-63页 |
| ·参考文献 | 第63-64页 |
| 第5章 福氏志贺氏菌磷酸化蛋白的检测 | 第64-73页 |
| ·前言 | 第64-65页 |
| ·材料与方法 | 第65-66页 |
| ·菌株 | 第65页 |
| ·主要化学试剂与耗材 | 第65页 |
| ·主要仪器、分析软件 | 第65-66页 |
| ·溶液的配置 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-68页 |
| ·全菌蛋白磷酸化样品的制备 | 第66-67页 |
| ·双向电泳 | 第67页 |
| ·western blotting | 第67页 |
| ·胶内酶切和MALDI-TOF/MS鉴定 | 第67-68页 |
| ·结果 | 第68-71页 |
| ·全菌蛋白磷酸化样品双向电泳和western blotting图 | 第68-69页 |
| ·质谱鉴定结果 | 第69-71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| ·参考文献 | 第72-73页 |
| 第6章 结论与建议 | 第73-75页 |
| 蛋白负染方法在蛋白质组学中的应用评价 | 第75-76页 |
| 个人简历 | 第76页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
