| 英文缩略词表 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第13-22页 |
| 1.1 蛴螬的危害 | 第13-14页 |
| 1.1.1 蛴螬的习性与为害特点 | 第13-14页 |
| 1.1.2 蛴螬的生物防治研究进展 | 第14页 |
| 1.2 昆虫病原微生物 | 第14-16页 |
| 1.2.1 昆虫病原真菌 | 第14-15页 |
| 1.2.2 昆虫病原细菌 | 第15-16页 |
| 1.3 昆虫病原真菌分子致病机制及基因工程研究进展 | 第16-20页 |
| 1.3.1 昆虫病原真菌侵染与致病过程 | 第16-17页 |
| 1.3.2 与昆虫病原真菌入侵相关的酶 | 第17-19页 |
| 1.3.3 基因工程 | 第19-20页 |
| 1.4 技术路线 | 第20-21页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-45页 |
| 2.1 含有cry8E基因绿僵菌工程菌的构建 | 第22-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基、抗生素与常用溶液配制 | 第22-24页 |
| 2.1.3 酶与生化试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 中间载体HCB-8e的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.2 Camben-8e双元载体的构建 | 第26-29页 |
| 2.2.3 农杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.2.4 电击法转化根癌农杆菌 | 第29页 |
| 2.2.5 根癌农杆菌中载体Camben-8e的检测 | 第29-30页 |
| 2.2.6 含重组质粒的农杆菌转化绿僵菌 | 第30页 |
| 2.2.7 绿僵菌单孢分离及遗传稳定性测定 | 第30页 |
| 2.3 转cry8E基因菌株的分子检测实验材料 | 第30-32页 |
| 2.3.1 主要试剂和药品 | 第30-31页 |
| 2.3.2 主要溶液及培养基的配制 | 第31-32页 |
| 2.3.3 主要仪器设备 | 第32页 |
| 2.4 转cry8E基因菌株的分子检测实验方法 | 第32-37页 |
| 2.4.1 转基因菌株的PCR检测 | 第32-33页 |
| 2.4.2 转基因菌株的Southern blot检测 | 第33-37页 |
| 2.5 转基因菌株的生物测定及酶活分析实验材料 | 第37-39页 |
| 2.5.1 供试菌株及试剂 | 第37-38页 |
| 2.5.2 供试虫源 | 第38页 |
| 2.5.3 主要溶液及培养基的配制 | 第38-39页 |
| 2.5.4 主要仪器设备 | 第39页 |
| 2.6 转基因菌株的生物测定实验方法 | 第39-40页 |
| 2.7 转基因菌株的酶活分析实验方法 | 第40-42页 |
| 2.7.1 粗酶液制备 | 第40页 |
| 2.7.2 蛋白酶活性测定 | 第40-41页 |
| 2.7.3 几丁质酶活性测定 | 第41页 |
| 2.7.4 磷脂酶活性测定 | 第41页 |
| 2.7.5 蛋白含量测定 | 第41-42页 |
| 2.8 转基因菌株解除东亚飞蝗免疫差异研究 | 第42页 |
| 2.8.1 供试菌株及试剂 | 第42页 |
| 2.8.2 供试虫源 | 第42页 |
| 2.8.3 主要溶液及培养基的配制 | 第42页 |
| 2.8.4 主要仪器设备 | 第42页 |
| 2.9 不同处理对东亚飞蝗生物测定实验方法 | 第42-43页 |
| 2.10 东亚飞蝗免疫相关酶活测定方法 | 第43-45页 |
| 2.10.1 粗酶液制备 | 第43页 |
| 2.10.2 全酯酶(ESTs)活性测定 | 第43页 |
| 2.10.3 乙酰胆碱酯酶(AChE)活性测定 | 第43页 |
| 2.10.4 酚氧化酶(PO)活性测定 | 第43页 |
| 2.10.5 保护酶活性测定 | 第43-44页 |
| 2.10.6 蛋白含量测定 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-56页 |
| 3.1 含有cry8E基因绿僵菌工程菌的构建 | 第45-48页 |
| 3.1.1 载体HCB-8e的构建 | 第45-46页 |
| 3.1.2 表达载体pCAMBIA1300-ben-8e的构建 | 第46页 |
| 3.1.3 根癌农杆菌中载体pCAMBIA1300-ben-8e的检测 | 第46-47页 |
| 3.1.4 含重组质粒的农杆菌转化金龟子绿僵菌 | 第47页 |
| 3.1.5 转化子单孢分离 | 第47-48页 |
| 3.2 转基因菌株的分子检测 | 第48-49页 |
| 3.2.1 转基因菌株的PCR检测 | 第48页 |
| 3.2.2 转基因菌株的Southern blot检测 | 第48-49页 |
| 3.3 转基因菌株的生物测定与酶活分析 | 第49-52页 |
| 3.3.1 转基因菌株的生物测定 | 第49-50页 |
| 3.3.2 转基因菌株的酶活测定 | 第50-51页 |
| 3.3.3 酶活与毒力的相关性分析 | 第51-52页 |
| 3.4 转基因菌株解除东亚飞蝗免疫差异研究 | 第52-56页 |
| 3.4.1 不同处理对东亚飞蝗的生物测定 | 第52-53页 |
| 3.4.2 转基因菌株对东亚飞蝗体内酶活性的影响 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-61页 |
| 4.1 绿僵菌工程菌构建 | 第56页 |
| 4.2 转基因菌株生物测定与酶活分析 | 第56-59页 |
| 4.2.1 蛋白酶与毒力关系 | 第56-57页 |
| 4.2.2 几丁质酶和磷脂酶与毒力的关系 | 第57-58页 |
| 4.2.3 蛋白酶、几丁质酶、磷脂酶之间的相互关系 | 第58-59页 |
| 4.3 转基因菌株解除东亚飞蝗免疫差异研究 | 第59-61页 |
| 5 全文结论 | 第61-62页 |
| 5.1 高毒力工程菌构建 | 第61页 |
| 5.2 胞外酶与毒力之间的关系 | 第61页 |
| 5.3 不同处理对东亚飞蝗的毒力 | 第61页 |
| 5.4 转基因菌株对东亚飞蝗体内酶活性影响 | 第61-62页 |
| 6 参考文献 | 第62-74页 |
| 7 附录 | 第74-76页 |
| 8 致谢 | 第76-78页 |
| 9 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第78页 |
