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鸡白细胞介素18成熟蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达及其活性检测

中文摘要第1-14页
英文摘要第14-16页
1 引言第16-39页
   ·白细胞介素-18的研究进展第16-27页
     ·IL-18 的发现第16页
     ·IL-18 的分布及产生第16-17页
     ·IL-18 的基因结构和基因表达调控第17-18页
     ·IL-18 的受体与信号转导第18-19页
     ·IL-18 的生物学功能第19-27页
   ·鸡白细胞介素18 的研究进展第27-29页
     ·鸡白细胞介素18 的发现第27页
     ·鸡白细胞介素18 的研究现状第27-29页
   ·昆虫杆状病毒表达载体系统研究进展第29-38页
     ·昆虫杆状病毒的分子生物学第30-32页
     ·昆虫杆状病毒表达系统研究的新进展第32-34页
     ·昆虫杆状病毒表达载体系统的优越性第34-35页
     ·昆虫杆状病毒表达载体系统的应用第35-38页
   ·研究的目的与意义第38-39页
2 材料与方法第39-60页
   ·材料第39-45页
     ·菌株与质粒第39-40页
     ·细胞、受体菌及细胞培养基第40-41页
     ·主要试剂第41页
     ·培养基及主要试剂的配制方法第41-44页
     ·仪器与设备第44-45页
   ·方法第45-60页
     ·引物设计及合成第46页
     ·mChIL-18 成熟蛋白基因的PCR 扩增第46-47页
     ·mChIL-18 重组转移载体的构建及鉴定第47-51页
       ·PCR 产物的回收与纯化第47-48页
       ·PCR产物与转移载体pFastBacTM HTb连接第48页
       ·DH5α感受态细胞的制备方法第48页
       ·连接产物转化DH5α感受态细胞第48-49页
       ·重组质粒的鉴定第49-51页
     ·重组质粒的转座(即构建重组Bacmid)第51-53页
       ·DH10Bac~(TM) 感受态细胞的制备第51页
       ·重组质粒转座DH10Bac 感受态细胞第51-52页
       ·重组BacmidDNA的提取及鉴定第52-53页
     ·重组Bacmid 转染sf9昆虫细胞及收获重组杆状病毒第53-57页
       ·重组Bacmid转染sf9昆虫细胞第53-54页
       ·重组杆状病毒的收获及其DNA的提取与鉴定第54-55页
       ·扩增P1代病毒原液第55-56页
       ·噬斑测定病毒滴度第56-57页
     ·mChIL-18在sf9昆虫细胞中的表达及其检测第57-58页
       ·m ChIL-18在sf9昆虫细胞中的表达第57页
       ·SDS-PAGE及Western-blotting检测第57页
       ·IFA检测第57-58页
     ·表达产物的生物学活性测定第58-60页
       ·mChIL-18融合蛋白促进鸡脾淋巴细胞增殖试验(MTT法)第58-59页
       ·mChIL-18融合蛋白诱导鸡脾淋巴细胞产生IFN-γ第59页
       ·mChIL-18融合蛋白诱导的IFN-γ对VSV的抑制活性第59-60页
3 结果与分析第60-73页
   ·mChIL-18成熟蛋白基因的PCR扩增第60-61页
   ·重组转移载体的构建及鉴定第61-63页
     ·重组转移载体的PCR和双酶切鉴定第61-63页
     ·重组转移载体的序列测定第63页
   ·重组Bacmid 的鉴定第63-65页
   ·重组杆状病毒的 DNA 鉴定第65页
   ·mChIL-18 在sf9 昆虫细胞中的表达及检测第65-71页
     ·表达产物的SDS-PAGE 分析第65-69页
     ·表达产物的Western blotting检测第69-70页
     ·表达产物的IFA检测第70-71页
   ·mChIL-18蛋白生物学活性的测定第71-73页
     ·mChIL-18融合蛋白促进鸡脾淋巴细胞增殖试验第71-72页
     ·mChIL-18融合蛋白诱导鸡脾淋巴细胞产生IFN-γ第72页
     ·mChIL-18融合蛋白诱导的IFN-γ对VSV的抑制作用第72-73页
4 讨论第73-78页
   ·mChIL-18 重组转移载体的构建及鉴定第73-75页
   ·mChIL-18 在sf9 昆虫细胞中的表达及其检测第75-76页
   ·表达产物的生物学活性测定第76-78页
5 结论第78-79页
参考文献第79-90页
附录第90-93页
致谢第93-94页
攻读学位期间发表论文情况第94页

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