中文摘要 | 第1-14页 |
英文摘要 | 第14-16页 |
1 引言 | 第16-39页 |
·白细胞介素-18的研究进展 | 第16-27页 |
·IL-18 的发现 | 第16页 |
·IL-18 的分布及产生 | 第16-17页 |
·IL-18 的基因结构和基因表达调控 | 第17-18页 |
·IL-18 的受体与信号转导 | 第18-19页 |
·IL-18 的生物学功能 | 第19-27页 |
·鸡白细胞介素18 的研究进展 | 第27-29页 |
·鸡白细胞介素18 的发现 | 第27页 |
·鸡白细胞介素18 的研究现状 | 第27-29页 |
·昆虫杆状病毒表达载体系统研究进展 | 第29-38页 |
·昆虫杆状病毒的分子生物学 | 第30-32页 |
·昆虫杆状病毒表达系统研究的新进展 | 第32-34页 |
·昆虫杆状病毒表达载体系统的优越性 | 第34-35页 |
·昆虫杆状病毒表达载体系统的应用 | 第35-38页 |
·研究的目的与意义 | 第38-39页 |
2 材料与方法 | 第39-60页 |
·材料 | 第39-45页 |
·菌株与质粒 | 第39-40页 |
·细胞、受体菌及细胞培养基 | 第40-41页 |
·主要试剂 | 第41页 |
·培养基及主要试剂的配制方法 | 第41-44页 |
·仪器与设备 | 第44-45页 |
·方法 | 第45-60页 |
·引物设计及合成 | 第46页 |
·mChIL-18 成熟蛋白基因的PCR 扩增 | 第46-47页 |
·mChIL-18 重组转移载体的构建及鉴定 | 第47-51页 |
·PCR 产物的回收与纯化 | 第47-48页 |
·PCR产物与转移载体pFastBacTM HTb连接 | 第48页 |
·DH5α感受态细胞的制备方法 | 第48页 |
·连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第48-49页 |
·重组质粒的鉴定 | 第49-51页 |
·重组质粒的转座(即构建重组Bacmid) | 第51-53页 |
·DH10Bac~(TM) 感受态细胞的制备 | 第51页 |
·重组质粒转座DH10Bac 感受态细胞 | 第51-52页 |
·重组BacmidDNA的提取及鉴定 | 第52-53页 |
·重组Bacmid 转染sf9昆虫细胞及收获重组杆状病毒 | 第53-57页 |
·重组Bacmid转染sf9昆虫细胞 | 第53-54页 |
·重组杆状病毒的收获及其DNA的提取与鉴定 | 第54-55页 |
·扩增P1代病毒原液 | 第55-56页 |
·噬斑测定病毒滴度 | 第56-57页 |
·mChIL-18在sf9昆虫细胞中的表达及其检测 | 第57-58页 |
·m ChIL-18在sf9昆虫细胞中的表达 | 第57页 |
·SDS-PAGE及Western-blotting检测 | 第57页 |
·IFA检测 | 第57-58页 |
·表达产物的生物学活性测定 | 第58-60页 |
·mChIL-18融合蛋白促进鸡脾淋巴细胞增殖试验(MTT法) | 第58-59页 |
·mChIL-18融合蛋白诱导鸡脾淋巴细胞产生IFN-γ | 第59页 |
·mChIL-18融合蛋白诱导的IFN-γ对VSV的抑制活性 | 第59-60页 |
3 结果与分析 | 第60-73页 |
·mChIL-18成熟蛋白基因的PCR扩增 | 第60-61页 |
·重组转移载体的构建及鉴定 | 第61-63页 |
·重组转移载体的PCR和双酶切鉴定 | 第61-63页 |
·重组转移载体的序列测定 | 第63页 |
·重组Bacmid 的鉴定 | 第63-65页 |
·重组杆状病毒的 DNA 鉴定 | 第65页 |
·mChIL-18 在sf9 昆虫细胞中的表达及检测 | 第65-71页 |
·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第65-69页 |
·表达产物的Western blotting检测 | 第69-70页 |
·表达产物的IFA检测 | 第70-71页 |
·mChIL-18蛋白生物学活性的测定 | 第71-73页 |
·mChIL-18融合蛋白促进鸡脾淋巴细胞增殖试验 | 第71-72页 |
·mChIL-18融合蛋白诱导鸡脾淋巴细胞产生IFN-γ | 第72页 |
·mChIL-18融合蛋白诱导的IFN-γ对VSV的抑制作用 | 第72-73页 |
4 讨论 | 第73-78页 |
·mChIL-18 重组转移载体的构建及鉴定 | 第73-75页 |
·mChIL-18 在sf9 昆虫细胞中的表达及其检测 | 第75-76页 |
·表达产物的生物学活性测定 | 第76-78页 |
5 结论 | 第78-79页 |
参考文献 | 第79-90页 |
附录 | 第90-93页 |
致谢 | 第93-94页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第94页 |