| CONTENTS | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第13-18页 |
| 1.1 弓形虫及弓形虫病 | 第13-14页 |
| 1.1.1 弓形虫的流行病学 | 第13页 |
| 1.1.2 弓形虫病的危害 | 第13-14页 |
| 1.1.3 弓形虫病的治疗 | 第14页 |
| 1.2 寄生虫半胱氨酸蛋白酶 | 第14-16页 |
| 1.2.1 半胱氨酸蛋白酶家族分类 | 第14页 |
| 1.2.2 寄生虫半胱氨酸蛋白酶的生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.2.3 弓形虫组织蛋白酶B(TgCPB) | 第15-16页 |
| 1.3 基因敲除 | 第16-17页 |
| 1.3.1 基因敲除技术的概念及原理 | 第16页 |
| 1.3.2 基因敲除技术的方法 | 第16-17页 |
| 1.3.3 基因敲除技术的应用 | 第17页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-36页 |
| 2.1 材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 虫株与菌种 | 第18页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.1.5 主要溶液的配制 | 第19-20页 |
| 2.1.6 主要应用软件 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-36页 |
| 2.2.1 弓形虫TgCPB缺失质粒5’-3’-TgCPB-phle-pBluescript的构建 | 第20-24页 |
| 2.2.2 弓形虫TgCPB缺失株的筛选及鉴定 | 第24-29页 |
| 2.2.3 弓形虫TgCPB生物学特性分析 | 第29-36页 |
| 3 结果 | 第36-49页 |
| 3.1 弓形虫组织蛋白酶B缺失载体构建 | 第36-40页 |
| 3.1.1 PCR方法扩增弓形虫组织蛋白酶B 5’-UTR及3’-UTR | 第36-37页 |
| 3.1.2 TgCPB-5’UTR-PMD18T质粒酶切鉴定 | 第37页 |
| 3.1.3 5’UTR-T-pBluescript质粒酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 3.1.4 5’UTR-T-pBluescript-3’UTR质粒酶切鉴定 | 第38页 |
| 3.1.5 5’UTR-T-pBluescript-phle转染质粒酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 3.1.6 5’UTR-T-pBluescript-3’UTR-phle质粒线性化 | 第39-40页 |
| 3.2 TgCPB缺失株的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.1 PCR鉴定 | 第40页 |
| 3.2.2 Southem-blotting鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3 TgCPB基因生物学特性研究 | 第41-49页 |
| 3.3.1 增殖实验 | 第41-43页 |
| 3.3.2 粘附实验 | 第43页 |
| 3.3.3 侵入实验 | 第43-44页 |
| 3.3.4 小鼠体内实验 | 第44-45页 |
| 3.3.5 NO含量的检测 | 第45-46页 |
| 3.3.6 TgCPB的虫体定位 | 第46-49页 |
| 4 讨论 | 第49-53页 |
| 4.1 TgCPB缺失株的构建及单克隆的筛选 | 第49-50页 |
| 4.2 TgCPB缺失株的生物学特性研究 | 第50-53页 |
| 4.2.1 NO含量的检测 | 第50页 |
| 4.2.2 流式细胞术检测TgCPB基因缺失后虫体增殖速度 | 第50-51页 |
| 4.2.3 粘附、侵入、增殖特性的研究 | 第51-52页 |
| 4.2.4 间接免疫荧光实验检测TgCPB基因的虫体定位 | 第52-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第60页 |
