| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 缩写词表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-28页 |
| 2.1 研究对象 | 第15页 |
| 2.2 实验仪器与试剂 | 第15-18页 |
| 2.2.1 主要仪器设备、耗材及试剂 | 第15-17页 |
| 2.2.1.1 主要仪器 | 第15-16页 |
| 2.2.1.2 主要耗材、试剂 | 第16-17页 |
| 2.2.1.3 其他常用试剂 | 第17页 |
| 2.2.2 溶液配制 | 第17页 |
| 2.2.3 引物 | 第17-18页 |
| 2.3 实验步骤 | 第18-28页 |
| 2.3.1 分离外周血CD4~+T细胞 | 第18-19页 |
| 2.3.1.1 正常人外周静脉血单个核细胞分离 | 第18页 |
| 2.3.1.2 免疫磁珠法分离CD4~+T细胞 | 第18-19页 |
| 2.3.2 活化正常人外周血CD4~+T细胞 | 第19-20页 |
| 2.3.3 MPA处理活化后正常人CD4~+T细胞 | 第20页 |
| 2.3.4 流式细胞术检测CD4~+T细胞CD40L的蛋白表达水平 | 第20-21页 |
| 2.3.5 细胞凋亡检测 | 第21页 |
| 2.3.6 miRNA表达谱芯片检测 | 第21页 |
| 2.3.7 RNA抽提和实时定量RT-PCR | 第21-24页 |
| 2.3.7.1 抽提RNA | 第21-22页 |
| 2.3.7.2 Real-time PCR | 第22-24页 |
| 2.3.8 CHIP-PCR | 第24-27页 |
| 2.3.8.1 DNA-蛋白质交联、DNA剪切及免疫共沉淀(IP) | 第24-26页 |
| 2.3.8.2 纯化DNA | 第26页 |
| 2.8.3.3 RT-PCR扩增miR-142、miR-146a启动子区片段 | 第26-27页 |
| 2.3.9 统计学分析 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-38页 |
| 3.1 1μm/1 MPA可以有效抑制正常CD4~+T细胞活化但不诱导细胞凋亡 | 第28-30页 |
| 3.1.1 比较1μm/l、5μmn/l、10μm/lMPA各药物处理组与甲醇溶媒对照组CD4+T细胞CD40L蛋白表达水平 | 第28-29页 |
| 3.1.2 1μm/l、5μm/l、10μm/lMPA各药物处理组与甲醇溶媒对照组CD4~+T细胞凋亡率 | 第29-30页 |
| 3.2 MPA调控SLE患者CD4~+T细胞miRNA表达 | 第30-33页 |
| 3.2.1 miRNA表达谱芯片检测MPA处理后差异表达的miRNA | 第31页 |
| 3.2.2 筛选差异表达的miRNA | 第31-32页 |
| 3.2.3 RT-PCR验证筛选后差异表达miRNA | 第32-33页 |
| 3.3 MPA通过调节组蛋白修饰水平调控miR-142及miR-146a基因表达 | 第33-38页 |
| 3.3.1 ChIP rereal-time PCR扩增片段在miR-142基因启动子区域的位置 | 第34页 |
| 3.3.2 ChIP rereal-time PCR扩增片段在miR-146a基因启动子区域的位置 | 第34页 |
| 3.3.3 MPA处理后SLECD4~+T细胞中miR-142启动子区组蛋白修饰状态 | 第34-36页 |
| 3.3.4 MPA处理后SLECD4~+T细胞中miR-146a启动子区组蛋白修饰状态 | 第36-38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 综述 | 第45-51页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 攻读硕士学位期间主要研究成果 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
