摘要 | 第4-7页 |
ABSTRACT | 第7-10页 |
英文缩略词表(ABBREVIATION) | 第13-15页 |
前言 | 第15-17页 |
1 实验材料、仪器与试剂 | 第17-25页 |
1.1 菌株、质粒和细胞株 | 第17页 |
1.2 仪器设备 | 第17-18页 |
1.3 主要试剂 | 第18页 |
1.4 主要溶液的配制 | 第18-25页 |
1.4.1 实验室培养基配制 | 第18-20页 |
1.4.2 核质分离试剂 | 第20-21页 |
1.4.3 SDS-PAGE 电泳液配制 | 第21-25页 |
2 实验方法 | 第25-37页 |
2.1 感受态细菌的制备 | 第25页 |
2.2 质粒的转化 | 第25页 |
2.3 质粒的提取 | 第25-26页 |
2.4 细胞培养 | 第26页 |
2.5 细胞计数 | 第26-27页 |
2.6 细胞稳定株的构建 | 第27-28页 |
2.6.1 细胞培养、转染 | 第27页 |
2.6.2 构建稳定株 | 第27-28页 |
2.7 细胞免疫荧光 | 第28页 |
2.8 RNA 抽取 | 第28页 |
2.9 逆转录 | 第28-29页 |
2.10 Realtime PCR | 第29页 |
2.11 western blotting 检测蛋白表达水平 | 第29-32页 |
2.12 Luciferase Assay | 第32-33页 |
2.13 核质分离实验方法 | 第33页 |
2.14 体内 pull down assay 实验方法 | 第33-34页 |
2.15 构建突变质粒 | 第34-37页 |
3 实验结果 | 第37-45页 |
3.1 质粒的鉴定 | 第37页 |
3.2 稳定株的构建 | 第37-38页 |
3.3 BAT1 与 Hsf4b 细胞免疫荧光结果分析 | 第38-39页 |
3.4 Realtime PCR 测定 BAT1 对 Hsf4b 下游基因αB 和 hsp25 在 mRNA 水平的情况 | 第39-40页 |
3.5 luciferase assay 实验结果 | 第40页 |
3.6 western blotting 检测下游蛋白表达情况 | 第40-41页 |
3.7 核质输出实验结果 | 第41-42页 |
3.8 pull down 实验结果 | 第42页 |
3.9 构建 BAT1K95E 突变质粒,酶切鉴定及测序结果 | 第42-43页 |
3.10 构建 mLEC-BAT1K95E、mLEC-Hsf4b/BAT1K95E 稳定株 | 第43-44页 |
3.11 Realtime PCR 测定核输出位点突变的 BAT1 对 Hsf4b 下游基因αB 在 mRNA 水平的情况 | 第44-45页 |
4 讨论 | 第45-47页 |
结论 | 第47-49页 |
参考文献 | 第49-51页 |
综述 | 第51-65页 |
参考文献 | 第60-65页 |
致谢 | 第65-67页 |
在读期间发表的论文及获奖情况 | 第67-68页 |