| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第15-51页 |
| 1.1 引言 | 第15-16页 |
| 1.2 流感病毒概述 | 第16-20页 |
| 1.2.1 流感病毒的抗原性 | 第16-17页 |
| 1.2.2 流感病毒感染及免疫应答机制 | 第17-19页 |
| 1.2.3 流感疫苗免疫原性的评价指标 | 第19-20页 |
| 1.3 流感及H5N1禽流感疫苗临床研究进展 | 第20-32页 |
| 1.3.1 流感灭活疫苗 | 第20-24页 |
| 1.3.1.1 全病毒灭活疫苗 | 第21-22页 |
| 1.3.1.2 灭活型裂解疫苗与亚单位疫苗 | 第22-24页 |
| 1.3.1.3 基于细胞培养的灭活疫苗 | 第24页 |
| 1.3.2 减毒活疫苗 | 第24-27页 |
| 1.3.3 重组亚单位疫苗 | 第27页 |
| 1.3.4 病毒样颗粒疫苗 | 第27-28页 |
| 1.3.5 流感DNA疫苗 | 第28-29页 |
| 1.3.6 重组活载体疫苗 | 第29-32页 |
| 1.4 流感疫苗佐剂研究概述 | 第32-47页 |
| 1.4.1 铝盐佐剂 | 第33-34页 |
| 1.4.2 油乳佐剂 | 第34-36页 |
| 1.4.3 TLR激动剂 | 第36-38页 |
| 1.4.4 免疫刺激复合物 | 第38页 |
| 1.4.5 脂质体 | 第38-40页 |
| 1.4.6 可生物降解聚合物颗粒 | 第40-47页 |
| 1.4.6.1 壳聚糖及其衍生物 | 第40-42页 |
| 1.4.6.2 壳聚糖微球佐剂的应用研究 | 第42-43页 |
| 1.4.6.3 壳聚糖的免疫增强机制 | 第43-45页 |
| 1.4.6.4 壳聚糖颗粒型佐剂存在的问题 | 第45-47页 |
| 1.5 论文立题依据与研究思路 | 第47-51页 |
| 1.5.1 论文立题依据 | 第47-48页 |
| 1.5.2 研究思路与策略 | 第48-51页 |
| 2 壳聚糖季铵盐微球的制备及表征 | 第51-75页 |
| 2.1 引言 | 第51-52页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第52-59页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第52页 |
| 2.2.2 实验设备与仪器 | 第52-53页 |
| 2.2.3 壳聚糖季铵盐的合成 | 第53-54页 |
| 2.2.4 壳聚糖季铵盐季铵取代度的测定 | 第54页 |
| 2.2.5 壳聚糖季铵盐凝胶微球的制备 | 第54-55页 |
| 2.2.6 壳聚糖季铵盐化学交联微球的制备 | 第55页 |
| 2.2.7 壳聚糖季铵盐水凝胶的黏度及胶凝时间测定 | 第55-56页 |
| 2.2.8 壳聚糖季铵盐凝胶微球的表征 | 第56-57页 |
| 2.2.9 壳聚糖季铵盐微球对H5N1裂解抗原的吸附研究 | 第57-58页 |
| 2.2.10 壳聚糖季铵盐微球的细胞毒性研究 | 第58-59页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第59-72页 |
| 2.3.1 不同季铵取代度壳聚糖季铵盐的合成 | 第59-60页 |
| 2.3.2 壳聚糖季铵盐凝胶微球的干燥方法 | 第60-62页 |
| 2.3.3 预乳方式对快速膜乳化过程的影响 | 第62-63页 |
| 2.3.4 固化温度对快速膜乳化过程的影响 | 第63-64页 |
| 2.3.5 不同粒径凝胶微球的制备及表征 | 第64-65页 |
| 2.3.6 不同季铵取代度凝胶微球的制备及表征 | 第65-66页 |
| 2.3.7 壳聚糖季铵盐微球对H5N1裂解疫苗的吸附研究 | 第66-68页 |
| 2.3.7.1 季铵取代度对抗原吸附的影响 | 第67页 |
| 2.3.7.2 微球粒径对抗原吸附的影响 | 第67-68页 |
| 2.3.8 壳聚糖季铵盐凝胶微球与化学交联微球的颗粒特征对比 | 第68-69页 |
| 2.3.9 壳聚糖季铵盐微球的pH敏感性 | 第69-70页 |
| 2.3.10 壳聚糖季铵盐微球的抗原释放研究 | 第70-71页 |
| 2.3.11 壳聚糖季铵盐微球对抗原稳定性的影响 | 第71页 |
| 2.3.12 壳聚糖季铵盐微球的安全性研究 | 第71-72页 |
| 2.4 本章小结 | 第72-75页 |
| 3 壳聚糖季铵盐微球作为H5N1裂解疫苗佐剂的研究 | 第75-105页 |
| 3.1 引言 | 第75-76页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第76-84页 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 | 第76-77页 |
| 3.2.2 实验设备和仪器 | 第77页 |
| 3.2.3 缓冲容量的测定 | 第77-78页 |
| 3.2.4 溶血实验 | 第78页 |
| 3.2.5 疫苗制剂的制备 | 第78-79页 |
| 3.2.6 体外细胞实验 | 第79-81页 |
| 3.2.6.1 髓源树突细胞的培养及刺激 | 第79页 |
| 3.2.6.2 树突细胞对抗原的摄取及胞内定位实验 | 第79-80页 |
| 3.2.6.3 树突细胞的活化研究 | 第80-81页 |
| 3.2.7 小动物活体成像 | 第81页 |
| 3.2.8 注射部位组织切片检查 | 第81页 |
| 3.2.9 体内动物免疫实验方案 | 第81-84页 |
| 3.2.9.1 间接ELISA法检测血清抗体水平 | 第81-82页 |
| 3.2.9.2 血凝及血凝抑制(HI)实验 | 第82-83页 |
| 3.2.9.3 脾细胞悬液的制备及培养 | 第83-84页 |
| 3.2.9.4 脾细胞分泌细胞因子以及增殖活化水平的检测 | 第84页 |
| 3.2.10 数据统计分析 | 第84页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第84-101页 |
| 3.3.1 凝胶微球对红细胞膜的裂解能力研究 | 第84-85页 |
| 3.3.2 树突细胞对抗原的摄取 | 第85-86页 |
| 3.3.3 抗原的溶酶体逃逸途径 | 第86-88页 |
| 3.3.4 树突细胞的活化研究 | 第88-95页 |
| 3.3.5 抗原在注射部位的滞留情况 | 第95页 |
| 3.3.6 炎症细胞的募集 | 第95-96页 |
| 3.3.7 血清抗体水平评价 | 第96-98页 |
| 3.3.8 细胞介导的免疫应答评价 | 第98-101页 |
| 3.3.8.1 淋巴细胞表面标记物的检测 | 第98-101页 |
| 3.3.8.2 细胞因子分泌水平的检测 | 第101页 |
| 3.4 本章小结 | 第101-105页 |
| 4 微球特征对壳聚糖季铵盐凝胶微球佐剂效应的影响 | 第105-123页 |
| 4.1 引言 | 第105-106页 |
| 4.2 实验部分 | 第106-111页 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 | 第106页 |
| 4.2.2 实验设备与仪器 | 第106-107页 |
| 4.2.3 缓冲容量测定 | 第107页 |
| 4.2.4 红细胞溶血实验 | 第107页 |
| 4.2.5 树突细胞对抗原的摄取 | 第107-108页 |
| 4.2.6 抗原与溶酶体的共定位研究 | 第108页 |
| 4.2.7 树突细胞的活化研究 | 第108页 |
| 4.2.8 体内动物实验免疫方案 | 第108-110页 |
| 4.2.9 小鼠血清抗体的检测 | 第110页 |
| 4.2.10 血凝与血凝抑制实验 | 第110-111页 |
| 4.2.11 脾细胞培养上清因子的检测 | 第111页 |
| 4.2.12 数据统计分析 | 第111页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第111-121页 |
| 4.3.1 壳聚糖季铵盐的缓冲容量 | 第111-112页 |
| 4.3.2 季铵取代度与粒径对溶血实验的影响 | 第112-113页 |
| 4.3.3 体外细胞实验 | 第113-117页 |
| 4.3.3.1 树突细胞对抗原的摄取 | 第113-115页 |
| 4.3.3.2 抗原与溶酶体共定位研究 | 第115-116页 |
| 4.3.3.3 树突细胞的活化研究 | 第116-117页 |
| 4.3.4 粒径对免疫应答的影响 | 第117-119页 |
| 4.3.5 季铵取代度对免疫应答的影响 | 第119-120页 |
| 4.3.6 抗原节约效应 | 第120-121页 |
| 4.4 本章小结 | 第121-123页 |
| 5 壳聚糖季铵盐微球作为基因疫苗载体的初步探讨 | 第123-141页 |
| 5.1 引言 | 第123-124页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第124-129页 |
| 5.2.1 实验材料与试剂 | 第124-125页 |
| 5.2.2 实验仪器与设备 | 第125页 |
| 5.2.3 微球/质粒复合体的制备 | 第125页 |
| 5.2.4 质粒以及微球/质粒复合体的形貌表征 | 第125-126页 |
| 5.2.5 微球对质粒吸附率的表征 | 第126页 |
| 5.2.6 琼脂糖凝胶电泳阻滞实验 | 第126-127页 |
| 5.2.7 DNase Ⅰ保护实验 | 第127页 |
| 5.2.8 细胞毒性实验 | 第127页 |
| 5.2.9 细胞转染实验 | 第127-129页 |
| 5.2.10 流式细胞仪检测细胞转染率 | 第129页 |
| 5.2.11 激光共聚焦显微镜观察荧光蛋白的表达情况 | 第129页 |
| 5.2.12 数据统计分析 | 第129页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第129-139页 |
| 5.3.1 质粒及微球/质粒复合体的形貌表征 | 第129-131页 |
| 5.3.2 壳聚糖季铵盐微球对质粒的吸附研究 | 第131-133页 |
| 5.3.3 壳聚糖季铵盐微球对质粒的保护研究 | 第133-134页 |
| 5.3.4 细胞毒性研究 | 第134页 |
| 5.3.5 细胞接种密度对基因转染率的影响 | 第134-135页 |
| 5.3.6 质粒数对基因转染率的影响 | 第135-136页 |
| 5.3.7 微球与质粒的质量比对基因转染率的影响 | 第136-137页 |
| 5.3.8 血清对基因转染率的影响 | 第137-139页 |
| 5.4 本章小结 | 第139-141页 |
| 6 结论与展望 | 第141-145页 |
| 6.1 主要结论 | 第141-142页 |
| 6.2 主要创新点 | 第142-143页 |
| 6.3 后期工作建议 | 第143-145页 |
| 附录主要符号表 | 第145-147页 |
| 参考文献 | 第147-157页 |
| 个人简历及发表文章目录 | 第157-159页 |
| 致谢 | 第159页 |
