| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第10-18页 |
| 1. CRMP的生物学功能和特点 | 第10-12页 |
| 2. 哮喘的危害、病理学机制及CRAMP/LL37的可能角色 | 第12-14页 |
| 3. 炎性肠病的危害、病理学机制及CRAMP/LL37的可能角色 | 第14-16页 |
| 4. 研究思路、目的及意义 | 第16-18页 |
| 第一部分 CRAMP在小鼠哮喘急性模型中的干预研究 | 第18-40页 |
| 1. 引言 | 第18-20页 |
| 2. 试验材料与方法 | 第20-29页 |
| 2.1. 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1. 试验动物 | 第20页 |
| 2.1.2. 细胞系 | 第20页 |
| 2.1.3. 主要试剂及耗材 | 第20-21页 |
| 2.1.4. 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2. 试验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1. CRAMP刺激RAW264.7细胞 | 第22页 |
| 2.2.2. 小鼠脾淋巴细胞的分离 | 第22-23页 |
| 2.2.3. CRAMP滴鼻免疫 | 第23页 |
| 2.2.4. 急性哮喘模型的建立 | 第23页 |
| 2.2.5. 急性哮喘模型的CRAMP干预 | 第23页 |
| 2.2.6. 肺灌洗液的采集和肺部浸润细胞计数 | 第23-24页 |
| 2.2.7. 采血和血清制备 | 第24页 |
| 2.2.8. 肺灌洗液细胞因子检测 | 第24-25页 |
| 2.2.9. 血清IgG1与IgG2a的检测 | 第25-26页 |
| 2.2.10. OVA的Biotin标记及血清中OVA特异的IgE检测 | 第26-27页 |
| 2.2.11. 肺组织切片,H&E染色及PAS染色 | 第27页 |
| 2.2.12. 肺组织切片的半定量打分 | 第27-29页 |
| 3. 结果与分析 | 第29-37页 |
| 3.1. 合成肽CRAMP生物活性评价 | 第29-31页 |
| 3.1.1. CRAMP显著抑制LPS刺激RAW264-7产生TNF-α | 第29页 |
| 3.1.2. CRAMP促进小鼠气道炎性细胞浸润及炎性细胞因子产生 | 第29-31页 |
| 3.2. 外源性CRAMP恶化OVA诱导的小鼠急性哮喘炎性应答 | 第31-37页 |
| 3.2.1. 模型建立及干预流程 | 第31页 |
| 3.2.2. CRAMP加重哮喘模型中炎性细胞的募集 | 第31-32页 |
| 3.2.3. CRAMP显著促进哮喘模型小鼠气道炎性细胞因子的产生 | 第32-33页 |
| 3.2.4. CRAMP对IgG1/IgG2a的应答偏向无显著影响 | 第33-34页 |
| 3.2.5. CRAMP促进OVA特异的IgE产生 | 第34-35页 |
| 3.2.6. CRAMP加重OVA诱导的小鼠肺部炎症 | 第35-37页 |
| 4. 讨论 | 第37-39页 |
| 4.1. 合成肽CRAMP具有良好的体内和体外生物活性 | 第37-38页 |
| 4.2. CRAMP对哮喘模型小鼠细胞因子表达的影响 | 第38页 |
| 4.3. CRAMP对OVA诱导的气道炎症的影响 | 第38-39页 |
| 5. 小结 | 第39-40页 |
| 第二部分 CRAMP在小鼠炎性肠病模型中的干预研究 | 第40-95页 |
| 1. 引言 | 第40-42页 |
| 2. 试验材料与方法 | 第42-59页 |
| 2.1 试验材料 | 第42-43页 |
| 2.1.1. 试验动物 | 第42页 |
| 2.1.2. 试剂及耗材 | 第42-43页 |
| 2.2. 试验方法 | 第43-59页 |
| 2.2.1. Oxazolone诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型 | 第43页 |
| 2.2.2. TNBS诱导的小鼠克隆氏病肠炎模型 | 第43页 |
| 2.2.3. CRAMP直肠给药对小鼠Oxazolone肠炎模型的干预 | 第43-44页 |
| 2.2.4. CRAMP腹腔给药对小鼠Oxazolone肠炎模型的干预 | 第44页 |
| 2.2.5. CRAMP腹腔给药对小鼠TNBS肠炎模型的干预 | 第44页 |
| 2.2.6. 小鼠肠组织取材 | 第44-45页 |
| 2.2.7. 用于ELISA检测的肠组织匀浆液的制备 | 第45页 |
| 2.2.8. 肠组织匀浆液的细胞因子ELISA检测 | 第45-46页 |
| 2.2.9. 肠组织总RNA提取 | 第46页 |
| 2.2.10. 肠组织mRNA的逆转录及Real-time PCR检测 | 第46-48页 |
| 2.2.11. 肠组织切片及H&E染色 | 第48页 |
| 2.2.12. 肠组织切片的半定量打分 | 第48-49页 |
| 2.2.13. CRAMP刺激小鼠脾细胞的XTT检测 | 第49页 |
| 2.2.14. 血清制备及血清中LPS的含量检测 | 第49-50页 |
| 2.2.15. 肠组织MPO检测 | 第50页 |
| 2.2.16. 脾淋巴细胞Th流式检测 | 第50-51页 |
| 2.2.17. 脾淋巴细胞Treg流式检测 | 第51页 |
| 2.2.18. 重组嵌合抗肽疫苗质粒的构建 | 第51-54页 |
| 2.2.19. 重组嵌合抗肽疫苗的表达纯化 | 第54-56页 |
| 2.2.20. 化学偶联抗肽疫苗的构建 | 第56页 |
| 2.2.21. 抗CRAMP疫苗的小鼠免疫 | 第56-57页 |
| 2.2.22. 抗肽疫苗免疫后的抗血清检测 | 第57-58页 |
| 2.2.23. 抗肽血清被动免疫干预Oxazolone诱导的小鼠肠炎 | 第58-59页 |
| 3. 结果与分析 | 第59-86页 |
| 3.1. CRAMP及其受体Fpr2在不同炎性肠病模型小鼠肠组织中的表达 | 第59-60页 |
| 3.2. CRAMP经直肠给药缓解了Oxazolone诱导的小鼠肠炎 | 第60-73页 |
| 3.2.1. 模型建立及干预流程 | 第60页 |
| 3.2.2. CRAMP提高模型小鼠生存率 | 第60-61页 |
| 3.2.3. CRAMP促进模型小鼠体重恢复 | 第61-62页 |
| 3.2.4. CRAMP显著降低模型小鼠肠组织单位长度的重量 | 第62-63页 |
| 3.2.5. CRAMP显著抑制模型小鼠肠组织炎性细胞因子的表达 | 第63-66页 |
| 3.2.6. CRAMP引起模型小鼠肠组织IFN-γ高表达 | 第66页 |
| 3.2.7. CRAMP不影响IL-33表达水平 | 第66-67页 |
| 3.2.8. CRAMP促进模型小鼠肠组织中组织修复相关基因的高表达 | 第67-68页 |
| 3.2.9. CRAMP抑制模型小鼠肠组织中嗜中性粒细胞趋化因子表达 | 第68-69页 |
| 3.2.10. CRAMP显著缓解模型小鼠肠上皮损伤与组织炎症 | 第69-71页 |
| 3.2.11. CRAMP增加模型小鼠肠组织中MPO水平 | 第71-72页 |
| 3.2.12. CRAMP不影响小鼠脾细胞中T细胞水平 | 第72-73页 |
| 3.3. 外源性CRAMP经腹腔给药对不同小鼠炎性肠病模型的作用 | 第73-81页 |
| 3.3.1. 模型建立及干预流程 | 第73页 |
| 3.3.2. CRAMP不引起正常小鼠的明显毒性反应 | 第73-74页 |
| 3.3.3. CRAMP降低Oxazolone而非TNBS诱导的炎性肠病模型小鼠生存率 | 第74-75页 |
| 3.3.4. CRAMP显著恶化Oxazolone而非TNBS诱导的模型小鼠体重下降 | 第75-76页 |
| 3.3.5. CRAMP未引起肠单位长度重量的显著变化 | 第76页 |
| 3.3.6. CRAMP抑制Oxazolone诱导小鼠细胞因子mRNA表达但未影响蛋白水平 | 第76-79页 |
| 3.3.7. CRAMP抑制Oxazolone诱导小鼠肠组织中组织修复相关因子表达 | 第79-80页 |
| 3.3.8. CRAMP引起正常小鼠腹腔中以嗜中性粒细胞为主的炎性细胞聚集 | 第80-81页 |
| 3.3.9. CRAMP不影响血清中LPS水平 | 第81页 |
| 3.4. 抗CRAMP疫苗构建及抗血清被动免疫干预Oxazolone诱导的肠炎 | 第81-86页 |
| 3.4.1. 重组嵌合抗CRAMP VLPs疫苗的构建 | 第82-83页 |
| 3.4.2. 化学偶联抗CRAMP疫苗的构建 | 第83-84页 |
| 3.4.3. 抗血清的制备及检测 | 第84页 |
| 3.4.4. 抗血清被动免疫Oxazolone诱导的炎性肠病模型小鼠 | 第84-85页 |
| 3.4.5. CRAMP不影响鼠脾细胞的增殖 | 第85-86页 |
| 4. 讨论 | 第86-93页 |
| 4.1. CRAMP经直肠给药途径对肠炎的治疗潜能 | 第87-89页 |
| 4.2. 腹腔给药途径对CRAMP针对炎性肠病治疗应用的影响 | 第89-93页 |
| 5. 小结 | 第93-95页 |
| 5.1. CRAMP经直肠给药对肠炎的治疗潜能 | 第93页 |
| 5.2. 腹腔给药途径对CRAMP针对炎性肠病治疗应用的影响 | 第93-95页 |
| 全文讨论 | 第95-97页 |
| 展望 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-104页 |
| 附录 | 第104-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 个人简介 | 第109-111页 |
