| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第1章 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 16元大环内酯的概述 | 第11-12页 |
| 1.2 碳霉素(Carbomycin)的概述 | 第12-14页 |
| 1.3 必特螺旋霉素的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.4 链霉菌途径特异性调控 | 第17-20页 |
| 1.4.1 链霉菌次级代谢产物合成基因簇 | 第17-18页 |
| 1.4.2 链霉菌途径特异性调控 | 第18-20页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第20-56页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-34页 |
| 2.1.1 生物信息学分析工具 | 第20页 |
| 2.1.2 基因 | 第20-21页 |
| 2.1.3 质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.4 菌种 | 第22-25页 |
| 2.1.5 引物 | 第25-28页 |
| 2.1.6 试剂 | 第28-30页 |
| 2.1.7 培养基 | 第30-32页 |
| 2.1.8 常用缓冲液 | 第32-33页 |
| 2.1.9 仪器 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-56页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| 2.2.2 质粒DNA转化到大肠杆菌 | 第34页 |
| 2.2.3 大肠杆菌质粒DNA小量提取 | 第34-35页 |
| 2.2.4 DNA琼脂糖凝胶电泳和片段回收 | 第35-36页 |
| 2.2.5 PCR反应 | 第36-37页 |
| 2.2.6 DNA限制性酶切及粘性末端的去磷酸化和平滑化 | 第37页 |
| 2.2.7 DNA连接与转化 | 第37页 |
| 2.2.8 链霉菌基因组的提取 | 第37-38页 |
| 2.2.9 链霉菌原生质体的制备、再生及DNA转化原生质体 | 第38-39页 |
| 2.2.10 链霉菌-大肠杆菌间的接合转移 | 第39-40页 |
| 2.2.11 Southern blot杂交和菌落原位杂交 | 第40-43页 |
| 2.2.12 cbmR基因的发现与克隆 | 第43页 |
| 2.2.13 cbmR和acyB2的基因敲除 | 第43-45页 |
| 2.2.14 cbmR和acyB2基因的互补和过表达突变株 | 第45-46页 |
| 2.2.15 耐热链霉菌的发酵和产物检测 | 第46-47页 |
| 2.2.16 耐热链霉菌中碳霉素合成基因簇基因的测序和分析 | 第47页 |
| 2.2.17 RNA提取,RT-qPCR | 第47-50页 |
| 2.2.18 CbmR和AcyB2蛋白在大肠杆菌中的表达及表达条件的优化 | 第50-53页 |
| 2.2.19 S. lividans TK24转化子的构建 | 第53-54页 |
| 2.2.20 S. lividans TK24转化子对螺旋霉素的体外转化和产物检测 | 第54-56页 |
| 第3章 实验结果 | 第56-81页 |
| 3.1 在耐热链霉菌中克隆出一个新基因cbmR | 第56-58页 |
| 3.2 碳霉素生物合成基因簇的测序和序列分析 | 第58-63页 |
| 3.2.1 内脂环合成和修饰的基因 | 第58页 |
| 3.2.2 糖基侧链合成和连接的相关基因 | 第58-63页 |
| 3.2.3 产物转运分泌相关基因和抗性基因 | 第63页 |
| 3.2.4 调控基因 | 第63页 |
| 3.3 cbmR和acyB2基因的阻断,回复及过表达突变菌株的验证 | 第63-66页 |
| 3.4 chmR对碳霉素生物合成起重要的调控作用 | 第66-68页 |
| 3.5 acyB2对碳霉素生物合成具有正调控作用 | 第68-71页 |
| 3.6 cbmR和acyB2对碳霉素生物合成基因簇中基因的表达起重要的调控作用 | 第71-73页 |
| 3.7 CbmR和AcyB2蛋白的表达 | 第73-76页 |
| 3.7.1 CbmR蛋白的表达 | 第73-74页 |
| 3.7.2 AcyB2蛋白的表达 | 第74-76页 |
| 3.8 各S. lividans TK24转化子对螺旋霉素进行生物转化的影响 | 第76-77页 |
| 3.9 L-亮氨酸对各S. lividans TK24转化子生成ISP的影响 | 第77-80页 |
| 3.10 其它L型氨基酸对S. lividons TK24转化子生成ISP的影响 | 第80-81页 |
| 第4章 讨论 | 第81-84页 |
| 总结 | 第84-86页 |
| 论文主要结果 | 第84-85页 |
| 论文创新点 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-93页 |
| 英文缩写说明 | 第93-96页 |
| 氨基酸缩写 | 第96-97页 |
| 附录 | 第97-99页 |
| 论文发表 | 第97-98页 |
| 学术会议 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
