| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-23页 |
| 1 十字花科细菌性黑斑病的研究进展 | 第10-12页 |
| ·十字花科细菌性黑斑病的病原生物学 | 第10页 |
| ·十字花科细菌性黑斑病的病害症状 | 第10页 |
| ·十字花科细菌性黑斑病的病害分布、病原菌鉴定和冠毒素 | 第10-11页 |
| ·十字花科细菌性黑斑病的病害侵染循环 | 第11页 |
| ·十字花科细菌性黑斑病的防治方法 | 第11-12页 |
| ·加强种子管理 | 第11-12页 |
| ·加强田间管理 | 第12页 |
| ·药剂防治 | 第12页 |
| 2 种传植物病原细菌检测技术的研究进展 | 第12-21页 |
| ·传统的种传病原细菌的检测方法 | 第13页 |
| ·种传植病细菌的血清学检测方法 | 第13-15页 |
| ·酶联免疫吸附测定 | 第13页 |
| ·直接琼脂双扩散 | 第13-14页 |
| ·免疫放射分析法 | 第14页 |
| ·免疫荧光分析法 | 第14页 |
| ·免疫荧光菌落染色 | 第14-15页 |
| ·免疫吸附免疫荧光 | 第15页 |
| ·免疫分离法 | 第15页 |
| ·免疫亲合分离 | 第15页 |
| ·PCR 技术在种传细菌检测中的应用 | 第15-19页 |
| ·用特定基因和 DNA 序列判断、鉴定病害 | 第16-17页 |
| ·以rDNA 为模板的 PCR 分析 | 第17-19页 |
| ·免疫学和 PCR 技术相结合的检测方法 | 第19页 |
| ·免疫 PCR | 第19页 |
| ·免疫磁性分离-PCR | 第19页 |
| ·实时荧光定量 PCR(Real-time Quantitative PCR)检测技术 | 第19-21页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| ·本研究的目的 | 第21-22页 |
| ·本研究的意义 | 第22-23页 |
| 第二章 十字花科蔬菜细菌性黑斑病菌的分离培养检测 | 第23-27页 |
| 1 材料与方法 | 第23-25页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·供试菌株 | 第23-24页 |
| ·菌株的活化、培养及保存 | 第24页 |
| ·细菌性黑斑病菌的培养基选择性测定 | 第24-25页 |
| 2 结果 | 第25页 |
| ·细菌性黑斑病菌的培养基选择性测定结果 | 第25页 |
| 3 小结与讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 十字花科蔬菜细菌性黑斑病菌的免疫学检测 | 第27-36页 |
| 1 材料与方法 | 第27-31页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·供试菌株及种子 | 第27页 |
| ·试剂及器材 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-31页 |
| ·抗原制备 | 第28页 |
| ·抗体的制备 | 第28-29页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第29页 |
| ·抗体专一性检测 | 第29-30页 |
| ·测定间接 ELlSA 法对靶标抗原的检测精度 | 第30页 |
| ·测定间接 ELISA 法对模拟种子带菌检测的精度 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-34页 |
| ·抗血清的效价 | 第31-32页 |
| ·试管凝集法检测抗血清专一性的结果 | 第32页 |
| ·间接 ELISA 法检测抗体专一性结果 | 第32-33页 |
| ·间接 ELISA 法对靶标菌抗原的检测精度 | 第33-34页 |
| ·间接 ELISA 法模拟种子带菌检测的精度 | 第34页 |
| 3 小结与讨论 | 第34-36页 |
| ·小结 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 十字花科蔬菜细菌性黑斑病菌的常规 PCR 检测 | 第36-45页 |
| 1 材料与方法 | 第36-39页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·供试菌株、材料及仪器 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-39页 |
| ·细菌基因组 DNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·丁香假单胞属两个亚种165-23S rDNA ITS 的克隆和测序 | 第37-38页 |
| ·细菌性黑斑病菌专一性引物的设计、合成 | 第38页 |
| ·专一性引物的检测 | 第38页 |
| ·黑斑病菌菌体 PCR | 第38-39页 |
| ·模拟种子带菌菌体 PCR 检测 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-43页 |
| ·靶标菌及非靶标菌染色体 DNA 提取和部分菌 ITS 扩增结果 | 第39页 |
| ·3935、SM-15 和 Psl-2 菌株 ITS 的序列测定与分析 | 第39-41页 |
| ·3935、SM-15 和 Psl-2 菌株 ITS 的序列 | 第39-40页 |
| ·假单胞菌属11 个亚种165-23S rDNA ITS 的同源性分析 | 第40-41页 |
| ·细菌性黑斑病菌株3935 扩增产物与国外报道序列的比对 | 第41页 |
| ·3935 专一性引物的设计、合成结果 | 第41-42页 |
| ·黑斑病菌引物的专一性检测结果 | 第42页 |
| ·十字花科细菌性黑斑病菌菌体 PCR 结果 | 第42-43页 |
| ·模拟种子带菌菌体 PCR 检测结果 | 第43页 |
| 3 小结与结论 | 第43-45页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 第五章 免疫吸附 PCR(IMS-PCR)检测细菌性黑斑病菌 | 第45-49页 |
| 1 材料与方法 | 第45-46页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·供试菌株、试材及仪器 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-46页 |
| ·Dynal 免疫磁珠(IMBs)的处理 | 第45页 |
| ·配制菌悬液 | 第45-46页 |
| ·免疫吸附 PCR(IMBs-PCR)模拟检测种子带菌 | 第46页 |
| ·对多菌株混合液进行 IMS-PCR 检测，判断检测的专一性 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-48页 |
| ·IMS-PCR 模拟种子带菌检测的结果 | 第46-47页 |
| ·对多菌株及种子混合液进行 IMS-PCR 的检测结果 | 第47-48页 |
| 3 小结与讨论 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 第六章 Real-time PCR 检测十字花科细菌性黑斑病菌的初步研究 | 第49-53页 |
| 1 Real-time PCR 的荧光策略 | 第49页 |
| 2 材料与方法 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·供试菌株、种子 | 第49页 |
| ·试剂、仪器 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-50页 |
| ·TaqMan 水解探针的设计及合成 | 第49-50页 |
| ·TaqMan 水解探针可用性、专一性测定 | 第50页 |
| ·Real-time PCR 模拟种子带菌检测 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-52页 |
| ·TaqMan 水解探针的合成结果 | 第50-51页 |
| ·TaqMan 水解探针可用性、专一性测定结果 | 第51-52页 |
| ·Real-time PCR 模拟种子带菌检测结果 | 第52页 |
| 4 小结与讨论 | 第52-53页 |
| 第七章 十字花科蔬菜种子带菌快速检测方法的建立 | 第53-55页 |
| 1 材料与方法 | 第53页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·方法 | 第53页 |
| ·带菌种子抽样的模拟 | 第53页 |
| ·病原菌的分离及培养 | 第53页 |
| ·病原菌的 IMS-(real-time)PCR | 第53页 |
| 2 结果 | 第53-54页 |
| ·种子带菌 IMS-PCR 检测结果 | 第53-54页 |
| ·种子带菌检测的实时定量 PCR 结果 | 第54页 |
| 3 小结与结论 | 第54-55页 |
| 第八章 结论与讨论 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
