| 中文摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-25页 |
| 1.1 紫杉醇简介 | 第9-10页 |
| 1.2 紫杉醇的抗癌作用机理 | 第10页 |
| 1.3 紫杉醇生产方法 | 第10-15页 |
| 1.3.1 从红豆杉中提取 | 第10-11页 |
| 1.3.2 植物组织细胞培养 | 第11页 |
| 1.3.3 紫杉醇化学全合成 | 第11-12页 |
| 1.3.4 紫杉醇化学半合成 | 第12页 |
| 1.3.5 微生物发酵法 | 第12-14页 |
| 1.3.6 基因工程 | 第14-15页 |
| 1.4 紫杉醇合成途径中关键酶基因的研究 | 第15页 |
| 1.5 cDNA文库构建 | 第15-22页 |
| 1.5.1 普通cDNA文库的构建 | 第17页 |
| 1.5.2 差减文库 | 第17-18页 |
| 1.5.3 均一化cDNA文库 | 第18页 |
| 1.5.4 全长cDNA文库 | 第18-21页 |
| 1.5.5 cDNA文库的筛选和应用 | 第21-22页 |
| 1.6 生物信息学 | 第22页 |
| 1.7 本试验研究的目的和意义及主要内容 | 第22-25页 |
| 1.7.1 本试验研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 1.7.2 本试验研究的主要内容 | 第24-25页 |
| 第2章 材料与方法 | 第25-48页 |
| 2.1 试验材料 | 第25-31页 |
| 2.1.1 菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 培养基 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要生物化学与分子生物学试剂 | 第26-28页 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 | 第28-29页 |
| 2.1.5 质粒 | 第29页 |
| 2.1.6 引物设计 | 第29-30页 |
| 2.1.7 探针序列 | 第30-31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-48页 |
| 2.2.1 菌株HDFS_(4-26)紫杉醇产生时间的确定 | 第31-32页 |
| 2.2.2 总RNA提取 | 第32-33页 |
| 2.2.3 mRNA的分离 | 第33-35页 |
| 2.2.4 cDNA第一链的合成 | 第35页 |
| 2.2.5 cDNA第二链的合成 | 第35-37页 |
| 2.2.6 双链cDNA与attB1接头连接 | 第37页 |
| 2.2.7 cDNA片段的分级分离及收集 | 第37-38页 |
| 2.2.8 BP重组反应 | 第38-39页 |
| 2.2.9 电转化大肠杆菌DH10B | 第39-40页 |
| 2.2.10 初始文库滴度检测 | 第40页 |
| 2.2.11 重组率和插入片段长度鉴定 | 第40-41页 |
| 2.2.12 固定化亲和体系的构建 | 第41-42页 |
| 2.2.13 杂交和洗脱 | 第42-43页 |
| 2.2.14 电转化,构建筛选文库 | 第43-44页 |
| 2.2.15 筛选文库重组率和插入片段长度鉴定 | 第44-45页 |
| 2.2.16 EST测序 | 第45-48页 |
| 第3章 结果和分析 | 第48-75页 |
| 3.1 菌株HDFS_(4-26)紫杉醇产生时间的确定 | 第48-50页 |
| 3.2 全长cDNA文库构建 | 第50-75页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第50-51页 |
| 3.2.2 第一链cDNA的检测 | 第51-52页 |
| 3.2.3 cDNA文库的库容量 | 第52页 |
| 3.2.4 重组率和插入片段长度鉴定 | 第52-55页 |
| 3.2.5 筛选文库的库容量 | 第55-56页 |
| 3.2.6 筛选文库的重组率和插入片段长度鉴定 | 第56页 |
| 3.2.7 紫杉醇产生菌HDFS_(4-26)EST测序结果初步分析 | 第56-58页 |
| 3.2.8 ESTs功能注释及GO分类 | 第58-75页 |
| 第4章 讨论 | 第75-77页 |
| 4.1 菌株HDFS_(4-26)紫杉醇产生时间的确定 | 第75页 |
| 4.2 高质量RNA的提取 | 第75页 |
| 4.3 初级cDNA文库 | 第75-76页 |
| 4.4 EST结果分析 | 第76-77页 |
| 第5章 结论 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第89-90页 |
| 攻读硕士学位期间参与研究课题情况 | 第90-91页 |
