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辣椒溶杆菌全基因组序列特征及其pks-nrps基因簇的初步功能分析

中文摘要第10-11页
Abstract第11-12页
1 引言第13-31页
    1.1 生防微生物的研究概况第13-22页
        1.1.1 生防微生物的种类第13页
        1.1.2 生防微生物的生防机制第13-17页
            1.1.2.1 竞争作用第14页
            1.1.2.2 抗生作用第14-15页
            1.1.2.3 重寄生作用第15-16页
            1.1.2.4 诱导植物抗病性第16-17页
            1.1.2.5 捕食作用和溶菌作用第17页
        1.1.3 生防细菌的种类第17-20页
            1.1.3.1 植物根际促生细菌第18页
            1.1.3.2 海洋生防细菌第18-19页
            1.1.3.3 植物内生细菌第19-20页
        1.1.4 生防细菌的作用机理第20-21页
            1.1.4.1 群体感应现象及其特点第20页
            1.1.4.2 群体感应系统及其信号分子第20-21页
            1.1.4.3 群体感应的应用第21页
        1.1.5 生防细菌的在植物病害防治中的应用前景第21-22页
    1.2 微生物全基因组研究进展第22-24页
        1.2.1 微生物基因组学的兴起和发展第22-23页
        1.2.2 基因测序技术的产生和发展第23-24页
    1.3 辣椒溶杆菌研究概况第24-25页
        1.3.1 辣椒溶杆菌的生物学分类地位第24-25页
        1.3.2 辣椒溶杆菌的生物学特性第25页
        1.3.3 溶杆菌属基因组研究现状及意义第25页
    1.4 非核糖体多肽合成酶及聚酮合酶第25-28页
        1.4.1 非核糖体多肽合成酶及其结构域第27页
        1.4.2 聚酮合酶及其结构域第27-28页
    1.5 热稳定抗真菌因子(Heat-Stable Antifungal Fastor,HSAF)的研究现状第28-29页
        1.5.1 HSAF的来源和命名第28页
        1.5.2 HSAF的结构特点第28页
        1.5.3 HSAF的生物合成第28-29页
        1.5.4 HSAF的生物活性和作用机理第29页
    1.6 本研究的目的、意义第29-31页
2 材料与方法第31-43页
    2.1 实验材料第31-32页
        2.1.1 实验仪器第31页
        2.1.2 菌株及质粒第31页
        2.1.3 酶与试剂第31-32页
        2.1.4 寡聚核苷酸引物第32页
    2.2 实验方法第32-43页
        2.2.1 基因组DNA提取第32-33页
        2.2.2 基因组DNA检测第33页
        2.2.3 基因组测序和组装第33页
        2.2.4 基因组序列分析第33-34页
            2.2.4.1 基因组组分预测第33页
            2.2.4.2 基因功能注释与分析第33-34页
            2.2.4.3 PKS/NRPS基因簇分析第34页
        2.2.5 目的基因插入体系的构建第34-38页
            2.2.5.1 目的基因内部片段的克隆第34-35页
            2.2.5.2 目的片段的回收第35页
            2.2.5.3 大肠杆菌化学感受态的制备第35页
            2.2.5.4 目的片段的连接与转化第35-36页
            2.2.5.5 质粒DNA的小量提取第36-37页
            2.2.5.6 质粒的小量酶切第37页
            2.2.5.7 重组质粒的构建第37-38页
        2.2.6 重组质粒的转化第38-39页
            2.2.6.1 L. capsici X2-3 抗生素的耐受水平测试第38页
            2.2.6.2 辣椒溶杆菌电转感受态的制备第38页
            2.2.6.3 重组质粒的电转化及重组子的筛选第38-39页
        2.2.7 重组子的鉴定第39-40页
            2.2.7.1 形态鉴定第39页
            2.2.7.2 PCR鉴定第39-40页
        2.2.8 突变体拮抗活性的检测第40-43页
3 结果与分析第43-61页
    3.1 基因组DNA的提取第43页
    3.2 基因组的测序数据统计第43-44页
    3.3 基因组序列组装第44-45页
        3.3.1 基因组大小估计第44页
        3.3.2 基因组组装分析第44-45页
    3.4 基因组组分分析第45-47页
        3.4.1 编码基因预测与分析第45-46页
        3.4.2 其他组分预测与分析第46-47页
    3.5 基因功能注释与分析第47-52页
        3.5.1 GO数据库注释与分析第47-48页
        3.5.2 KEGG数据库注释与分析第48-49页
        3.5.3 COG数据库注释与分析第49-52页
    3.6 PKS及NRPS基因簇分析第52页
    3.7 突变体系的构建第52-55页
        3.7.1 pks-nrps基因簇结构分析第52-53页
        3.7.2 pks-nrps基因簇内部片段的克隆第53页
        3.7.3 重组质粒的验证第53-55页
    3.8 重组质粒的转化及重组子筛选第55页
        3.8.1 L. capsici X2-3 抗生素的耐受水平测试第55页
        3.8.2 重组子的筛选第55页
    3.9 重组子的鉴定第55-57页
        3.9.1 形态鉴定第55-56页
        3.9.2 PCR鉴定第56-57页
    3.10 突变体抗菌活性的检测第57-61页
        3.10.1 DisP2-3 和DisN2-3 抗菌活性检测第57-58页
        3.10.2 DP2-3 和DN2-3 抗菌活性检测第58-61页
4 讨论第61-63页
    4.1 L. capsici X2-3 基因组特征分析第61-62页
    4.2 L. capsici X2-3 中pks-nrps基因簇的功能分析第62-63页
5 结论第63-65页
参考文献第65-73页
致谢第73-75页
攻读学位期间发表论文第75页

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