| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第12-38页 |
| 1.1 微囊藻毒素的爆发 | 第12-14页 |
| 1.2 微囊藻毒素的化学性质 | 第14-17页 |
| 1.2.1 微囊藻毒素的分子结构 | 第14-15页 |
| 1.2.2 微囊藻毒素的化学性质 | 第15-17页 |
| 1.3 微囊藻毒素的毒理机制 | 第17-18页 |
| 1.3.1 微囊藻毒素的分子机理 | 第17-18页 |
| 1.3.2 微囊藻毒素的迁移转化 | 第18页 |
| 1.4 微囊藻毒素的毒效应 | 第18-23页 |
| 1.4.1 微囊藻毒素的肝毒性 | 第18-20页 |
| 1.4.2 微囊藻毒素的肾毒性 | 第20-21页 |
| 1.4.3 微囊藻毒素的生殖毒性 | 第21页 |
| 1.4.4 微囊藻毒素的免疫系统毒性 | 第21-22页 |
| 1.4.5 微囊藻毒素的心脏毒性 | 第22页 |
| 1.4.6 微囊藻毒素的致癌机理 | 第22-23页 |
| 1.5 微囊藻毒素的毒代动力学 | 第23-25页 |
| 1.5.1 微囊藻毒素代谢的蛋白磷酸酶抑制途径 | 第23页 |
| 1.5.2 微囊藻毒素代谢的损伤遗传物质 | 第23-24页 |
| 1.5.3 微囊藻毒素代谢的活性氧途径 | 第24-25页 |
| 1.5.4 微囊藻毒素代谢的其他途径 | 第25页 |
| 1.6 微囊藻毒素的水生生物生态毒理学 | 第25-27页 |
| 1.6.1 微囊藻毒素代谢的水生植物生态毒理学 | 第25-26页 |
| 1.6.2 微囊藻毒素代谢的鱼类生态毒理学 | 第26-27页 |
| 1.7 微囊藻毒素的毒素检测 | 第27-33页 |
| 1.7.1 微囊藻毒素的生物分析法 | 第28页 |
| 1.7.2 微囊藻毒素的物化分析方法 | 第28-32页 |
| 1.7.3 微囊藻毒素的免疫化学法 | 第32-33页 |
| 1.8 微囊藻毒素的去除技术 | 第33-37页 |
| 1.8.1 微囊藻毒素的生物去除法 | 第33-34页 |
| 1.8.2 微囊藻毒素的高级氧化技术 | 第34-35页 |
| 1.8.3 微囊藻毒素的降解菌株 | 第35-36页 |
| 1.8.4 微囊藻毒素的降解酶与降解机理 | 第36-37页 |
| 1.9 本研究的目的意义 | 第37-38页 |
| 第二章 材料和方法 | 第38-51页 |
| 2.1 实验中用到的试剂 | 第38-39页 |
| 2.2 实验中用到的仪器 | 第39-40页 |
| 2.3 寡核苷酸的溶解 | 第40页 |
| 2.4 基因合成的两步法 | 第40-43页 |
| 2.4.1 DA-PCR | 第40-41页 |
| 2.4.2 OE-PCR | 第41-42页 |
| 2.4.3 T7 核酸内切酶 I 处理 | 第42-43页 |
| 2.5 载体构建与测序 | 第43-47页 |
| 2.5.1 质粒提取 | 第43页 |
| 2.5.2 限制性内切酶消化 | 第43-44页 |
| 2.5.3 重组载体的连接 | 第44页 |
| 2.5.4 重组载体的热激转化 | 第44-46页 |
| 2.5.5 阳性克隆的菌落 PCR 法鉴定 | 第46-47页 |
| 2.6 MLRA 的表达与活性测定 | 第47页 |
| 2.6.1 外源基因的诱导表达 | 第47页 |
| 2.6.2 mlrA 活性测定 | 第47页 |
| 2.7 培养条件对 MLRA 表达的影响 | 第47-48页 |
| 2.7.1 蛋白胨对 MlrA 表达的影响 | 第47页 |
| 2.7.2 葡萄糖对 MlrA 表达的影响 | 第47-48页 |
| 2.7.3 MC-LR 浓度对 MlrA 表达的影响 | 第48页 |
| 2.7.4 诱导时间对 MlrA 表达的影响 | 第48页 |
| 2.7.5 培养温度对 MlrA 表达的影响 | 第48页 |
| 2.7.6 菌体密度对 MlrA 表达的影响 | 第48页 |
| 2.7.7 pH 对 MlrA 表达的影响 | 第48页 |
| 2.8 NI~(2+)柱亲和层析纯化 MLRA | 第48-50页 |
| 2.8.1 Ni~(2+)柱亲和层析纯化 mlrA | 第48-49页 |
| 2.8.2 表达外源蛋白的 SDS-PAGE 检测 | 第49页 |
| 2.8.3 Folin-酚法测定蛋白 | 第49-50页 |
| 2.9 水环境中的微囊藻毒素降解实验 | 第50-51页 |
| 2.9.1 纯化 mlrA 对水环境中的微囊藻毒素降解实验 | 第50页 |
| 2.9.2 冻干乳酸乳球菌对水环境中的微囊藻毒素降解实验 | 第50页 |
| 2.9.3 构建乳酸乳球工程菌在自然水体中生长及微囊藻毒素降解实验 | 第50-51页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第51-78页 |
| 3.1 L.LACTIS 偏爱密码子编码的 MLRA 基因合成 | 第51-62页 |
| 3.1.1 鞘氨醇单胞菌 ACM-3962 的 mlrA 氨基酸序列 | 第51页 |
| 3.1.2 逆编码所用乳酸乳球菌密码子频率表 | 第51-53页 |
| 3.1.3 L.lactis 偏爱密码子编码的 mlrA 基因 | 第53页 |
| 3.1.4 拟合成序列全长 | 第53页 |
| 3.1.5 单链寡核苷酸的拆分 | 第53-55页 |
| 3.1.6 化学合成寡核苷酸的溶解与混合 | 第55-58页 |
| 3.1.7 两步法合成结果 | 第58-60页 |
| 3.1.8 亚克隆载体构建与测序 | 第60-62页 |
| 3.2 MLRA 启动子的合成与功能验证 | 第62-70页 |
| 3.2.1 拟合成序列全长 | 第62页 |
| 3.2.2 单链寡核苷酸的拆分 | 第62-64页 |
| 3.2.3 化学合成寡核苷酸的溶解与混合 | 第64-66页 |
| 3.2.4 两步法合成结果 | 第66-67页 |
| 3.2.5 功能验证载体构建与测序 | 第67-68页 |
| 3.2.6 mlr 启动子功能验证 | 第68-70页 |
| 3.3 乳酸乳球菌表达载体构建 | 第70-72页 |
| 3.3.1 乳酸乳球菌表达载体 pMG-mlr 的构建 | 第70页 |
| 3.3.2 重组子的菌落 PCR 鉴定 | 第70页 |
| 3.3.3 重组载体 pMG-mlr 的诱导表达 | 第70-72页 |
| 3.4 培养条件对 MLRA 表达的影响 | 第72-75页 |
| 3.4.1 蛋白胨对 mlrA 表达的影响 | 第72页 |
| 3.4.2 葡萄糖对 MlrA 表达的影响 | 第72-73页 |
| 3.4.3 MC-LR 浓度对 MlrA 表达量的影响 | 第73页 |
| 3.4.4 诱导时间对 MlrA 表达量的影响 | 第73页 |
| 3.4.5 培养温度对 MlrA 表达量的影响 | 第73-74页 |
| 3.4.6 菌体密度对 MlrA 表达的影响 | 第74页 |
| 3.4.7 pH 对 MlrA 表达的影响 | 第74页 |
| 3.4.8 最适发酵工艺条件下的 mlrA 表达 | 第74-75页 |
| 3.5 NI~(2+)柱亲和层析纯化 MLRA | 第75-76页 |
| 3.5.1 Folin-酚法测定总蛋白质含量 | 第75页 |
| 3.5.2 Ni~(2+)柱亲和层析纯化 mlrA | 第75-76页 |
| 3.6 水环境中的微囊藻毒素降解实验 | 第76-78页 |
| 3.6.1 纯化 mlrA 对水环境中的微囊藻毒素降解实验 | 第76页 |
| 3.6.2 冻干乳酸乳球菌对水环境中的微囊藻毒素降解实验 | 第76-77页 |
| 3.6.3 构建乳酸乳球工程菌在自然水体中生长及微囊藻毒素降解实验 | 第77-78页 |
| 第四章 结论 | 第78-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
