| 目录 | 第1-7页 |
| 图表目录 | 第7-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 英文缩略语表 | 第12-15页 |
| 第一部分 埃博拉病毒包膜蛋白GP细胞毒性机理探讨 | 第15-53页 |
| 前言 | 第15-21页 |
| 1 埃博拉病毒简介 | 第15-20页 |
| ·临床表现 | 第15-16页 |
| ·病毒学分类 | 第16页 |
| ·病毒结构 | 第16-18页 |
| ·病毒基因组 | 第16-18页 |
| ·病毒蛋白 | 第18页 |
| ·病毒的进入 | 第18-19页 |
| ·宿主反应 | 第19页 |
| ·流行病学 | 第19页 |
| ·预防和治疗 | 第19-20页 |
| 2. 血管内皮细胞 | 第20-21页 |
| 1 实验材料 | 第21-26页 |
| ·质粒 | 第21页 |
| ·菌株 | 第21-22页 |
| ·细胞株 | 第22页 |
| ·工具酶、酶切缓冲液 | 第22页 |
| ·主要化学试剂 | 第22页 |
| ·细胞培养用耗材 | 第22页 |
| ·试剂盒 | 第22-23页 |
| ·主要仪器及设备 | 第23页 |
| ·主要溶液配方 | 第23-25页 |
| ·E.coli用培养基的配制 | 第23页 |
| ·抗生素的配制 | 第23页 |
| ·大量提取质粒DNA的相关溶液 | 第23-24页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳缓冲液及凝胶的配制 | 第24页 |
| ·细胞冻存液的配制 | 第24页 |
| ·细胞裂解液的配制 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳及相关缓冲液的配制 | 第24-25页 |
| ·蛋白纯化相关缓冲液配制 | 第25页 |
| ·常用缓冲液的配制 | 第25页 |
| ·主要抗体 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-39页 |
| ·PCR扩增 | 第26页 |
| ·酶切消化 | 第26-27页 |
| ·连接 | 第27页 |
| ·转化 | 第27页 |
| ·鉴定 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA的小提 | 第28页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第28-29页 |
| ·重组质粒DNA浓度的测定 | 第29页 |
| ·贴壁细胞培养 | 第29页 |
| ·细胞冻存 | 第29-30页 |
| ·细胞复苏 | 第30页 |
| ·细胞裂解 | 第30页 |
| ·ELISA检测方法 | 第30-31页 |
| ·Western Blotting检测方法(自蒋澄宇实验室手册) | 第31-32页 |
| ·蛋白纯化 | 第32-33页 |
| ·Bio-Rad方法测定蛋白浓度 | 第33-34页 |
| ·RNA提取 | 第34-36页 |
| ·HUVECs细胞的准备 | 第34-35页 |
| ·HUVECs细胞的回收 | 第35页 |
| ·RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·RNA浓度的测定 | 第36页 |
| ·RNA电泳 | 第36页 |
| ·细胞增殖和毒性检测实验(WST-1) | 第36-38页 |
| ·HUVECs细胞准备 | 第36-37页 |
| ·细胞计数 | 第37页 |
| ·传代96孔板 | 第37页 |
| ·加药处理 | 第37页 |
| ·细胞增殖及毒性检测(WST-1) | 第37-38页 |
| ·免疫荧光实验 | 第38-39页 |
| 3 实验结果 | 第39-48页 |
| ·GP1基因的优化合成 | 第39-40页 |
| ·pEAK13CD5LGP1TEVhFc质粒的构建 | 第40页 |
| ·GP1稳定细胞株的构建 | 第40-41页 |
| ·GP1及S1190-Fc蛋白的纯化 | 第41页 |
| ·GP1蛋白浓度的测定 | 第41-42页 |
| ·蛋白处理细胞形态学观察 | 第42-45页 |
| ·细胞增殖及细胞毒性检测实验(WST-1)结果 | 第45-46页 |
| ·RNA提取结果 | 第46-47页 |
| ·蛋白进入细胞Confocal结果 | 第47页 |
| ·VEGFR2 Western blotting结果 | 第47-48页 |
| 小结 | 第48-49页 |
| 讨论 | 第49-52页 |
| 参考文献 | 第52-53页 |
| 第二部分 埃博拉假病毒包装及GP多克隆抗体制备与效果评价 | 第53-69页 |
| 前言 | 第53-54页 |
| 1 实验材料 | 第54-56页 |
| ·质粒 | 第54页 |
| ·菌株 | 第54页 |
| ·细胞株 | 第54-55页 |
| ·实验动物 | 第55页 |
| ·主要试剂和抗体 | 第55-56页 |
| 2 实验方法 | 第56-60页 |
| ·假病毒的包装与感染 | 第56-57页 |
| ·三质粒系统包装假病毒 | 第56页 |
| ·二质粒系统假病毒的包装 | 第56-57页 |
| ·假病毒感染细胞 | 第57页 |
| ·荧光素酶实验 | 第57页 |
| ·pEAK13CD5LGP质粒、稳定细胞株构建及蛋白纯化 | 第57-58页 |
| ·pEAK13CD5LGP质粒构建及酶切鉴定 | 第57页 |
| ·GP1-Fc和S1190-Fc稳定细胞株的构建 | 第57-58页 |
| ·GP1-Fc和S1190-Fc蛋白的纯化 | 第58页 |
| ·动物免疫及抗体效果评价 | 第58-60页 |
| ·动物免疫实验 | 第58页 |
| ·ELISA检测GP抗体滴度 | 第58-59页 |
| ·Western blotting验证抗体滴度及特异性 | 第59-60页 |
| 3 实验结果 | 第60-64页 |
| ·三质粒系统假病毒包装结果 | 第60页 |
| ·二质粒系统假病毒包装结果 | 第60-61页 |
| ·pEAK13CD5LGP质粒构建及酶切鉴定 | 第61页 |
| ·GP1-Fc和S1190-Fc蛋白纯化 | 第61-62页 |
| ·ELISA检测GP抗体滴度 | 第62页 |
| ·GP1-Fc蛋白考马斯亮蓝染色 | 第62-63页 |
| ·免疫印迹方法验证GP抗体滴度及特异性 | 第63-64页 |
| 小结 | 第64-65页 |
| 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-69页 |
| 第三部分 酵母双杂交筛选SARS冠状病毒Spike相互作用蛋白 | 第69-82页 |
| 前言 | 第69-72页 |
| 1. 实验材料 | 第72-73页 |
| ·质粒 | 第72页 |
| ·酵母、菌株及其他试剂 | 第72-73页 |
| 2 实验方法 | 第73-76页 |
| ·酵母双杂交的筛选(酵母双杂交委托给天津赛尔生物有限公司) | 第73-74页 |
| ·酶切消化 | 第74页 |
| ·连接 | 第74-75页 |
| ·转化 | 第75页 |
| ·鉴定 | 第75页 |
| ·质粒DNA的小提 | 第75-76页 |
| 3 实验结果 | 第76-80页 |
| ·阳性文库质粒与诱饵质粒回转验证实验 | 第76-77页 |
| ·文库质粒测序结果 | 第77-79页 |
| ·Pull-down载体pGEX-6P-1-PLAM 3构建后酶切鉴定 | 第79-80页 |
| 小结 | 第80页 |
| 讨论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-82页 |
| 综述 A Mini-review on Ebola virus Pathogenesis | 第82-92页 |
| Referenees | 第89-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 个人简历 | 第93-94页 |
