| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 符号和缩略语说明 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1 灵芝及灵芝三萜的研究状况 | 第10-16页 |
| 1.1 灵芝的分类地位 | 第10页 |
| 1.2 灵芝的药用价值 | 第10页 |
| 1.3 灵芝三萜的研究状况 | 第10-15页 |
| 1.4 灵芝的分子生物学研究 | 第15-16页 |
| 2 鲨烯环氧酶的研究状况 | 第16-17页 |
| 3 类胡萝卜素及八氢番茄红素合酶的研究状况 | 第17-18页 |
| 3.1 类胡萝卜的生理功能 | 第17页 |
| 3.2 类胡萝卜素的合成途径 | 第17页 |
| 3.3 八氢番茄红素合酶的研究状况 | 第17-18页 |
| 4 本文选题依据 | 第18-20页 |
| 第二章 灵芝鲨烯环氧酶和八氢番茄红素合酶基因的克隆及沉默菌株的构建 | 第20-44页 |
| 1 实验材料 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-29页 |
| 2.1 序列分析 | 第20-21页 |
| 2.2 灵芝总RNA的提取及cDNA制备 | 第21-23页 |
| 2.3 鲨烯环氧酶和八氢番茄红素合酶基因序列比对及引物设计 | 第23页 |
| 2.4 Gl-se和Gl-psy基因cDNA全长的克隆 | 第23-25页 |
| 2.5 Gl-se和Gl-psy基因沉默载体的构建 | 第25-27页 |
| 2.6 Gl-se和Gl-psy基因沉默载体转化及转化子验证 | 第27-28页 |
| 2.7 实时荧光定量PCR | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-41页 |
| 3.1 鲨烯环氧酶和八氢番茄红素合酶基因序列的克隆 | 第29-31页 |
| 3.2 鲨烯环氧酶基因序列分析 | 第31-34页 |
| 3.3 八氢番茄红素合酶基因序列分析 | 第34-38页 |
| 3.4 鲨烯环氧酶和八氢番茄红素合酶的表达特性分析 | 第38-39页 |
| 3.5 沉默载体构建 | 第39-40页 |
| 3.6 灵芝沉默转化子的验证 | 第40-41页 |
| 4 小结与讨论 | 第41-44页 |
| 第三章 GL-SE和GL-PSY基因沉默对甲羟戊酸途径代谢产物及活性氧物质的影响 | 第44-60页 |
| 1 实验材料 | 第44-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-50页 |
| 2.1 固体培养菌落生长及观察 | 第45页 |
| 2.2 菌丝液体培养及观察 | 第45页 |
| 2.3 蛋白质含量测定 | 第45-46页 |
| 2.4 过氧化氢测定 | 第46-47页 |
| 2.5 过氧化氢酶(CAT)的活性测定 | 第47页 |
| 2.6 超氧化物歧化酶(SOD)的活性测定 | 第47-48页 |
| 2.7 转化子中灵芝三萜含量的测定 | 第48-49页 |
| 2.8 类胡萝卜素含量的测定 | 第49页 |
| 2.9 鲨烯、羊毛甾醇含量的测定 | 第49页 |
| 2.10 关键酶基因表达情况 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-58页 |
| 3.1 沉默转化子生长速度及抗氧化胁迫能力测定 | 第50-51页 |
| 3.2 沉默转化子活性氧物质测定 | 第51-53页 |
| 3.3 液体培养菌丝观察及活性氧相关测定 | 第53-55页 |
| 3.4 灵芝沉默转化子灵芝三萜含量的测定 | 第55页 |
| 3.5 灵芝沉默转化子鲨烯、羊毛甾醇及类胡萝卜素含量测定 | 第55-57页 |
| 3.6 灵芝三萜合成关键酶基因的表达情况 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 全文总结 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
