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草饲与谷饲安格斯牛瘤胃组织转录水平、DNA甲基化及microRNA表达差异性研究

摘要第6-8页
ABSTRACT第8-9页
第一章 文献综述第14-24页
    1.1 引言第14-15页
    1.2 牛肉肉质性状的重要性和意义第15-16页
    1.3 影响牛肉品质的因素第16-17页
        1.3.1 遗传因素对牛肉肉质性状的影响第16页
        1.3.2 年龄因素对牛肉品质的影响第16-17页
        1.3.3 日粮营养水平对牛肉品质的影响第17页
        1.3.4 饲料对牛肉品质的影响第17页
    1.4 草饲与谷饲牛肉第17-18页
    1.5 瘤胃机能第18-19页
    1.6 功能基因组学第19-20页
        1.6.1 牛功能基因组学的研究意义第19-20页
        1.6.2 功能基因组学在牛肉肉质性状研究中的应用第20页
    1.7 microRNA的特征及作用机制第20-21页
    1.8 DNA甲基化第21-22页
    1.9 研究目的和内容第22-24页
第二章 草饲与谷饲牛生长速度与肉质品质变化的研究第24-39页
    2.1 实验材料第24-25页
        2.1.1 实验动物第24页
        2.1.2 采样第24-25页
        2.1.3 主要试剂和仪器第25页
    2.2 实验方法第25页
        2.2.1 安格斯牛生长速度测定第25页
        2.2.2 烹制损失测定第25页
        2.2.3 剪切力测定第25页
        2.2.4 血液和肌肉代谢组学及代谢产物分析第25页
        2.2.5 生长及牛肉肉质性状测定数据分析第25页
    2.3 结果与分析第25-36页
        2.3.1 草饲牛与谷饲牛生长速度的比较分析第25-26页
        2.3.2 草饲牛与谷饲牛LD烹制损失和剪切力的差异分析第26页
        2.3.3 草饲牛和谷饲牛血液常规指标测定分析第26-27页
        2.3.4 草饲牛和谷饲牛血液代谢组学分析第27-31页
        2.3.5 草饲牛和谷饲牛肌肉代谢组学分析第31-36页
    2.4 讨论第36-38页
        2.4.1 草饲与谷饲牛的生长速度第36页
        2.4.2 草饲与谷饲牛的肉质性状第36-37页
        2.4.3 引起牛肉品质变化的原因分析第37-38页
    2.5 小结第38-39页
第三章 草饲与谷饲牛基因表达谱比较分析第39-72页
    3.1 实验材料第39-40页
        3.1.1 实验动物及样品采集第39页
        3.1.2 主要试剂第39页
        3.1.3 主要仪器第39页
        3.1.4 主要分子生物学软件第39-40页
    3.2 实验方法第40-48页
        3.2.1 总RNA提取第40-41页
        3.2.2 RNA质量检测第41页
        3.2.3 从totalRNA中提取mRNA第41页
        3.2.4 反转录合成c DNA第一条链第41-42页
        3.2.5 cDNA第二条链的合成第42-43页
        3.2.6 cDNA文库的构建第43-46页
        3.2.7 测序数据的分析第46页
        3.2.8 差异表达基因的功能富集分析第46页
        3.2.9 差异表达基因所参与的生物学调控通路的鉴定第46页
        3.2.10 qRT-PCR引物设计与合成第46-48页
        3.2.11 qRT-PCR验证数据结果分析第48页
    3.3 结果和分析第48-64页
        3.3.1 草饲牛与谷饲牛瘤胃组织总RNA的提取第48-49页
        3.3.2 测序数据的质量检测第49-50页
        3.3.3 草饲与谷饲肉牛差异表达基因的分析第50-51页
        3.3.4 qRT-PCR验证差异表达基因第51页
        3.3.5 差异表达基因的功能富集分析第51-53页
        3.3.6 IPA分析差异表达基因所参与的调控通路第53-54页
        3.3.7 IPA分析差异表达基因所参与的调控网络第54-64页
    3.4 讨论第64-70页
        3.4.1 实验动物来源及实验目的意义第65页
        3.4.2 高通量测序方法的选择与使用第65-66页
        3.4.3 差异表达基因的筛选标准第66页
        3.4.4 RNA-Seq测序分析结果的验证第66-67页
        3.4.5 草饲牛与谷饲牛牛肉肉质差异的分子机制第67-70页
    3.5 小结第70-72页
第四章 草饲与谷饲牛miRNA表达谱分析第72-83页
    4.1 实验材料第72-73页
        4.1.1 实验动物及样品采集第72页
        4.1.2 主要试剂第72页
        4.1.3 主要仪器第72-73页
        4.1.4 主要分子生物学软件第73页
    4.2 实验方法第73-76页
        4.2.1 瘤胃组织总RNA的提取第73页
        4.2.2 RNA质量检测第73页
        4.2.3 miRNA-Seq文库的构建第73-76页
        4.2.4 测序数据分析第76页
        4.2.5 miRNA的靶基因预测第76页
        4.2.6 miRNA的靶基因所涉及的GO terms和调控通路分析第76页
    4.3 结果与分析第76-81页
        4.3.1 草饲牛与谷饲牛瘤胃组织总RNA提取第76-77页
        4.3.2 测序数据的质量检测第77页
        4.3.3 草饲牛与谷饲牛瘤胃组织miRNA表达谱分析第77-78页
        4.3.4 差异表达miRNA bta-miR-122靶基因的功能富集分析第78-79页
        4.3.5 谷饲组肉牛特异性表达miRNA bta-miR-655靶基因的功能富集及所涉及的信号通路分析第79-80页
        4.3.6 miRNA-Seq与RNA-Seq的联合分析第80-81页
    4.4 讨论第81-82页
    4.5 小结第82-83页
第五章 草饲与谷饲牛DNA甲基化分析第83-101页
    5.1 实验材料第83-84页
        5.1.1 实验动物及样品采集第83页
        5.1.2 主要试剂第83页
        5.1.3 主要仪器第83-84页
        5.1.4 主要分子生物学软件第84页
    5.2 实验方法第84-91页
        5.2.1 DNA的提取及质量控制第84页
        5.2.2 甲基化DNA的富集第84-86页
        5.2.3 甲基结合DNA测序(MBD-Seq)文库的构建第86-89页
        5.2.4 测序数据分析第89页
        5.2.5 亚硫酸氢盐处理DNA第89-90页
        5.2.6 DNA甲基化分析结果验证引物的设计与合成第90页
        5.2.7 亚硫酸氢盐测序第90-91页
        5.2.8 结果分析第91页
    5.3 结果与分析第91-99页
        5.3.1 草饲牛与谷饲牛瘤胃组织总DNA提取第91页
        5.3.2 测序数据的质量检测第91-92页
        5.3.3 草饲牛与谷饲牛瘤胃组织甲基化谱分析第92-97页
        5.3.4 亚硫酸盐测序法验证甲基结合蛋白测序(MBD-Seq)数据第97-98页
        5.3.5 MBD-Seq与RNA-Seq的联合分析第98-99页
    5.4 讨论第99-100页
    5.5 小结第100-101页
第六章 结论第101-102页
    6.1 研究结论第101页
    6.2 创新点第101页
    6.3 下一步工作第101-102页
参考文献第102-112页
附录第112-145页
缩略词第145-146页
致谢第146-147页
作者简介第147-148页

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