| 缩略词 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 第一部分 GCC-Bac技术建立及有限克隆筛选验证 | 第18-32页 |
| 1. 材料 | 第18-19页 |
| ·菌株及质粒 | 第18页 |
| ·分子生物学工具酶以及试剂 | 第18页 |
| ·常用试剂盒 | 第18页 |
| ·主要实验仪器 | 第18-19页 |
| 2. 方法 | 第19-22页 |
| ·细菌细胞的甲醛固定 | 第19页 |
| ·细胞裂解 | 第19页 |
| ·超声破碎以及超滤浓缩 | 第19页 |
| ·末端补平及分子内连接 | 第19-20页 |
| ·DNA-Protein 的分离 | 第20页 |
| ·纯化回收样品 | 第20页 |
| ·T/A克隆 | 第20页 |
| ·T/A克隆效果快速检测 | 第20-21页 |
| ·转化以及蓝白斑筛选 | 第21-22页 |
| 3. 结果 | 第22-28页 |
| ·GCC 的质量控制 | 第22-28页 |
| ·超声条件的确定与优化 | 第22-23页 |
| ·补平条件的优化与确定 | 第23-26页 |
| ·分子内优先连接条件的优化与确定 | 第26-27页 |
| ·1.0 ng/μl 分子连接浓度下随机分子间连接发生与否的检测 | 第27-28页 |
| 4. 讨论 | 第28-31页 |
| 5. 小结 | 第31-32页 |
| 第二部分 高通量测序样品的制备 | 第32-70页 |
| 第一节 限制性内切酶切割制备高通量测序样品策略 | 第32-48页 |
| 1. 材料 | 第33-34页 |
| 2. 方法 | 第34-38页 |
| ·细菌的甲醛固定 | 第34页 |
| ·细菌细胞的裂解 | 第34页 |
| ·拟核的限制性酶切及分子内连接 | 第34-35页 |
| ·解交联以及除去RNA | 第35页 |
| ·生物素掺入以及分子自身连接 | 第35页 |
| ·自身连接产物的酶切以及纯化 | 第35-36页 |
| ·除去未自身连接的线性分子中的生物素标签 | 第36页 |
| ·捕获含生物素标签分子 | 第36页 |
| ·捕获样品的有限克隆测序 | 第36-38页 |
| 3. 结果 | 第38-46页 |
| ·拟核与基因组的酶切效果比较 | 第38页 |
| ·拟核与不同的buffer温浴结果比较 | 第38-39页 |
| ·拟核与超声buffer中不同成分混合温浴结果比较 | 第39-40页 |
| ·拟核经过不同浓度RNaseA消化后的结果比较 | 第40-41页 |
| ·基因组与交联拟核经Sau3A I及不同浓度RNaseA消化结果比较 | 第41-43页 |
| ·交联拟核酶切产物生物素的掺入、捕获以及克隆筛选 | 第43-46页 |
| 4. 讨论 | 第46-48页 |
| 第二节 利用SDS对交联拟核热处理灭活内源性核酸酶 | 第48-54页 |
| 1. 方法 | 第48-49页 |
| ·细菌的甲醛固定 | 第48页 |
| ·细菌细胞的裂解 | 第48页 |
| ·SDS热处理交联拟核 | 第48页 |
| ·解交联以及除去RNA | 第48页 |
| ·1%琼脂糖凝胶电泳检测SDS热处理效果 | 第48-49页 |
| 2. 结果 | 第49-53页 |
| ·不同浓度SDS热处理交联拟核效果比较 | 第49-50页 |
| ·SDS热处理交联拟核不同时间效果比较 | 第50-51页 |
| ·SDS的残留对于拟核稳定性的影响 | 第51-53页 |
| 3. 讨论 | 第53-54页 |
| 第三节 超声破碎制备高通量测序样品的策略 | 第54-70页 |
| 1. 材料 | 第54-59页 |
| ·细菌细胞的甲醛固定 | 第55页 |
| ·细胞裂解 | 第55页 |
| ·超声破碎以及超滤浓缩 | 第55页 |
| ·生物素掺入以及分子内近距离连接 | 第55-56页 |
| ·样品超声破碎、纯化 | 第56页 |
| ·除去单基因座位分子末端的生物素标记 | 第56页 |
| ·生物素样品的捕获 | 第56-57页 |
| ·捕获样品的有限克隆测序 | 第57-59页 |
| 3. 结果 | 第59-67页 |
| ·生物素掺入方法优化 | 第59-62页 |
| ·反应时间的优化 | 第62-67页 |
| 4. 讨论 | 第67-68页 |
| 5. 小结 | 第68-70页 |
| 研究总结 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 综述 | 第78-88页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 个人简历 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
