| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 文献综述 | 第9-18页 |
| 1.1 橡胶树磷素代谢研究进展 | 第9页 |
| 1.2 E3泛素连接酶在植物中的研究进展 | 第9-12页 |
| 1.2.1 E3泛素连接酶的分类 | 第9-10页 |
| 1.2.2 E3泛素连接酶的结构 | 第10页 |
| 1.2.3 泛素化修饰在植物中参与的调控作用 | 第10页 |
| 1.2.4 泛素化修饰参与低磷胁迫调控 | 第10-11页 |
| 1.2.5 橡胶树E3泛素连接酶的研究 | 第11-12页 |
| 1.3 蛋白质相互作用的筛选技术 | 第12-15页 |
| 1.3.1 噬茵体展示技术 | 第12页 |
| 1.3.2 表面等离子共振技术 | 第12-13页 |
| 1.3.3 荧光能量转移技术 | 第13页 |
| 1.3.4 蛋白质芯片技术 | 第13页 |
| 1.3.5 免疫共沉淀技术 | 第13-14页 |
| 1.3.6 pull-down技术 | 第14页 |
| 1.3.7 酵母双杂交系统 | 第14-15页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第15-17页 |
| 1.5 本研究的技术路线 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-34页 |
| 2.1 材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第18页 |
| 2.1.2 质粒及菌种 | 第18页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第18-19页 |
| 2.2 方法 | 第19-34页 |
| 2.2.1 橡胶树地上部地下部总RNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.2.2 mRNA的纯化 | 第20-21页 |
| 2.2.3 均一化cDNA的合成 | 第21-23页 |
| 2.2.4 均一化酵母双杂交文库构建 | 第23-25页 |
| 2.2.5 cDNA文库滴度的测定 | 第25页 |
| 2.2.6 文库插入片段大小检测 | 第25页 |
| 2.2.7 诱饵载体pGBKT7-HbSINAT2、pGBKT7-HbTIR1的构建 | 第25-30页 |
| 2.2.8 诱饵蛋白的自激活与毒性检测 | 第30页 |
| 2.2.9 HbSINAT2、HbTIR1互作蛋白的文库筛选 | 第30-32页 |
| 2.2.10 酵母菌落PCR及候选文库的质粒分离 | 第32-33页 |
| 2.2.11 富集候选文库质粒 | 第33页 |
| 2.2.12 候选质粒回转酵母及点对点验证: | 第33页 |
| 2.2.13 互作子基因全长克隆 | 第33页 |
| 2.2.14 生物信息学分析 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-51页 |
| 3.1 巴西橡胶树地上部地下部均一化酵母双杂交cDNA文库构建 | 第34-38页 |
| 3.1.1 巴西橡胶树地上部和地下部总RNA的提取 | 第34页 |
| 3.1.2 mRNA的纯化 | 第34-35页 |
| 3.1.3 ds-cDNA的合成及DSN均一化效果: | 第35-36页 |
| 3.1.4 均一化酵母双杂交文库构建及质量评价 | 第36-38页 |
| 3.2 诱饵载体构建 | 第38-40页 |
| 3.3 文库筛选 | 第40-47页 |
| 3.3.1 诱饵载体pGBKT7-HbSINAT2、pGBKT7-HbTIR1自激活和毒性检测 | 第40-41页 |
| 3.3.2 HbSINAT2、HbTIR1互作蛋白筛选 | 第41-42页 |
| 3.3.3 候选阳性克隆的菌落PCR检测 | 第42-43页 |
| 3.3.4 回转验证 | 第43-47页 |
| 3.4 生物信息学分析结果 | 第47-50页 |
| 3.5 候选阳性克隆功能预测 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| 4.1 酵母双杂交文库构建 | 第51页 |
| 4.2 酵母双杂交文库筛选 | 第51-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 附录 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
