| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 1 背景与综述 | 第11-25页 |
| 1.1 转基因山羊的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.1.1 转基因山羊概述 | 第11页 |
| 1.1.2 转基因山羊的研制方法 | 第11-13页 |
| 1.1.3 转基因山羊的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 定位整合转基因山羊的研究 | 第14-15页 |
| 1.2.1 基于同源重组的定点整合 | 第14页 |
| 1.2.2 基于位点特异性重组的定点整合 | 第14-15页 |
| 1.3 细胞穿透性Cre重组酶介导的定位重组系统 | 第15-22页 |
| 1.3.1 Cre/loxp系统的概述 | 第15页 |
| 1.3.2 Cre/loxp系统在转基因动物中的应用 | 第15-17页 |
| 1.3.3 提高重组效率的两种策略 | 第17-19页 |
| 1.3.4 Cre重组酶介导的盒式交换反应 | 第19-21页 |
| 1.3.5 Cre/loxp系统的变体 | 第21-22页 |
| 1.3.6 细胞穿透性Cre酶 | 第22页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 1.5 背景介绍及技术路线 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-41页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂材料 | 第25页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-41页 |
| 2.2.1 loxp定位整合细胞系的建立 | 第26-27页 |
| 2.2.2 鲑鱼降钙素定位整合质粒pTM-sCT2的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.3 TAT-Cre酶的表达与纯化 | 第29-32页 |
| 2.2.4 pBS185与pTM-sCT2共转染法实现定位整合 | 第32-35页 |
| 2.2.5 TAT-Cre介导pTM-sCT2质粒实现定位整合 | 第35-36页 |
| 2.2.6 人血清白蛋白定位整合质粒pTM-hSA2的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.7 TAT-Cre介导pTM-hSA2质粒实现定位整合 | 第37-38页 |
| 2.2.8 定位整合sCT和hSA阳性克隆的体细胞克隆 | 第38-40页 |
| 2.2.9 sCT定位整合转基因流产胎儿鉴定 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-60页 |
| 3.1 获得loxp定位整合细胞系 | 第41页 |
| 3.2 鲑鱼降钙素定位整合质粒pTM-sCT2的构建 | 第41-45页 |
| 3.3 TAT-Cre酶的表达与纯化 | 第45-47页 |
| 3.4 sCT整合克隆的结果鉴定 | 第47-52页 |
| 3.4.1 pBS185与pTM-sCT2共转BLG3 | 第47页 |
| 3.4.2 TAT-Cre介导pTM-sCT2质粒实现定位整合 | 第47-48页 |
| 3.4.3 sCT2定位整合克隆的PCR-测序分析 | 第48-52页 |
| 3.5 人血清白蛋白定位整合质粒pTM-hSA2的构建 | 第52-55页 |
| 3.6 hSA整合克隆的结果鉴定 | 第55-58页 |
| 3.7 定位整合sCT和hSA阳性克隆的体细胞克隆 | 第58-59页 |
| 3.8 sCT转基因山羊自然流产胎儿鉴定 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-65页 |
| 4.1 置换载体的构建及识别位点突变体的发现 | 第60-61页 |
| 4.2 Cre重组酶的导入方式 | 第61-62页 |
| 4.3 转基因片段大小对RMCE的影响 | 第62页 |
| 4.4 定位整合处理的体细胞对体细胞克隆的影响 | 第62页 |
| 4.5 乳腺生物反应器在sCT和hSA表达的应用 | 第62-63页 |
| 4.6 转基因家畜制备流程的简化 | 第63-64页 |
| 4.7 存在问题及进一步工作重点 | 第64-65页 |
| 5 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附录Ⅰ 溶液配方 | 第71-73页 |
| 附录Ⅱ 攻读学位期间发表的学术论文 | 第73页 |
