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猪圆环病毒2型的分离鉴定及其发病模型的建立

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
英文缩略词第7-11页
1 前言第11-21页
    1.1 圆环病毒病原特征第11-12页
        1.1.1 圆环病毒的分类第11-12页
        1.1.2 圆环病毒的理化性质第12页
        1.1.3 细胞培养特性第12页
    1.2 圆环病毒分子生物学特征第12-13页
        1.2.1 基因组结构第12页
        1.2.2 编码的蛋白第12-13页
    1.3 流行病学特征第13-15页
        1.3.1 PCV2流行情况和基因亚型第13页
        1.3.2 传播途径第13-15页
    1.4 临床症状第15-17页
        1.4.1 断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)第15页
        1.4.2 猪呼吸道疾病综合征(PRDC)第15-16页
        1.4.3 增生性坏死性肺炎(PNP)第16页
        1.4.4 PCV2引起的肺炎第16页
        1.4.5 PCV2引起的肠炎第16页
        1.4.6 繁殖障碍第16页
        1.4.7 猪皮炎肾病综合征(PDNS)第16-17页
    1.5 致病机制第17-18页
    1.6 诊断方法第18-20页
        1.6.1 PCV2抗体检测技术第18-19页
        1.6.2 PCV2核酸检测技术第19-20页
        1.6.3 PCV2抗原检测技术第20页
    1.7 PCV2感染模型第20-21页
    1.8 研究目的与意义第21页
2 材料和方法第21-33页
    2.1 材料第21-23页
        2.1.1 菌种、质粒和细胞第21页
        2.1.2 试验动物第21-22页
        2.1.3 主要仪器第22页
        2.1.4 主要试剂第22页
        2.1.5 实验所用溶液的配制第22-23页
    2.2 方法第23-33页
        2.2.1 组织样品的处理第23-24页
        2.2.2 引物设计与合成第24页
        2.2.3 病毒DNA的提取第24页
        2.2.4 PCR检测组织样品中的PCV2第24-25页
        2.2.5 病毒的分离与鉴定第25页
        2.2.6 间接免疫荧光试验第25页
        2.2.7 PCV2全基因组扩增第25-26页
        2.2.8 全基因DNA片段的纯化回收第26页
        2.2.9 全基因组DNA片段的连接第26页
        2.2.10 连接产物的转化第26-27页
        2.2.11 菌液的PCR鉴定及测序第27页
        2.2.12 序列分析及进化树的构建第27-28页
        2.2.13 荧光定量PCR引物设计第28页
        2.2.14 标准质粒的构建第28-29页
        2.2.15 标准曲线的构建第29页
        2.2.16 不同时间点细胞中PCV2的复制情况第29页
        2.2.17 D-氨基葡萄糖对PCV2培养的影响第29-30页
        2.2.18 血清抗体滴度检测第30页
        2.2.19 119-GD01分离株的攻毒方案第30-31页
        2.2.20 临床表现的观察第31页
        2.2.21 血清中PCV2核酸鉴定及其拷贝数测定第31页
        2.2.22 测定脏器组织中的PCV2载量第31页
        2.2.23 组织切片制备第31-32页
        2.2.24 免疫组化试验第32-33页
3 结果与分析第33-47页
    3.1 PCV2分离及鉴定结果第33-34页
    3.2 间接免疫荧光试验结果第34页
    3.3 PCV2分离株全基因扩增第34-35页
    3.4 PCV2分离株同源性分析和进化树构建及序列分析结果第35-38页
    3.5 荧光定量PCR试验的标准曲线第38-39页
    3.6 不同收获时间的病毒液中PCV2的DNA拷贝数第39-40页
    3.7 D-氨基葡萄糖处理对PCV2拷贝数的影响第40-41页
    3.8 攻毒实验结果第41-47页
        3.8.1 临床表现第41页
        3.8.2 剖检脏器宏观病理变化第41-42页
        3.8.3 血清中抗体滴度变化与病毒血症第42-43页
        3.8.4 四种脏器中的载毒量第43-44页
        3.8.5 组织切片及免疫组化第44-47页
4 讨论第47-50页
全文总结第50-51页
致谢第51-52页
参考文献第52-62页

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