| 缩略词对照表 | 第4-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Summary | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 奶牛乳房炎危害 | 第12-15页 |
| 1.1 奶牛乳房炎的危害 | 第12-13页 |
| 1.2 金黄色葡萄球菌概述 | 第13-15页 |
| 1.2.1 金黄色葡萄球菌的危害 | 第13页 |
| 1.2.2 金黄色葡萄球菌毒力因子 | 第13-15页 |
| 2 金黄色葡萄球菌 β-溶血素研究进展 | 第15-17页 |
| 2.1 金黄色葡萄球菌溶血素的分类 | 第15-16页 |
| 2.2 金黄色葡萄球菌 β-溶血素的制备 | 第16-17页 |
| 2.3 金黄色葡萄球菌 β-溶血素纯化方法 | 第17页 |
| 3 金黄色葡萄球菌疫苗研究进展 | 第17-19页 |
| 3.1 灭活苗 | 第17-18页 |
| 3.2 亚单位疫苗 | 第18页 |
| 3.3 重组载体疫苗 | 第18页 |
| 3.4 合成肽疫苗 | 第18-19页 |
| 3.5 基因疫苗 | 第19页 |
| 3.6 基因缺失疫苗 | 第19页 |
| 4 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 实验研究 | 第20-57页 |
| 实验一 溶血素基因型和表型相关性分析 | 第20-30页 |
| 1 材料与方法 | 第20-23页 |
| 1.1 菌株 | 第20页 |
| 1.2 方法 | 第20-23页 |
| 1.2.1 主要溶液的配制 | 第20-21页 |
| 1.2.2 溶血素基因检测 | 第21-23页 |
| 1.2.2.1 引物设计与合成 | 第21页 |
| 1.2.2.2 基因组DNA的提取 | 第21-22页 |
| 1.2.2.3 PCR扩增与凝胶电泳 | 第22-23页 |
| 1.2.2.4 测序 | 第23页 |
| 1.2.3 溶血性检测 | 第23页 |
| 2 结果 | 第23-28页 |
| 2.1 基因组DNA提取结果 | 第23-24页 |
| 2.2 溶血素基因检测结果 | 第24页 |
| 2.3 溶血性检测结果 | 第24-25页 |
| 2.4 溶血素基因型和表型相关性分析 | 第25-28页 |
| 3 讨论 | 第28-30页 |
| 实验二 β-溶血素基因真核重组质粒的构建与表达 | 第30-44页 |
| 1 材料与方法 | 第30-40页 |
| 1.1 材料 | 第30页 |
| 1.1.1 菌株与质粒 | 第30页 |
| 1.1.2 主要仪器和试剂 | 第30页 |
| 1.2 实验方法 | 第30-40页 |
| 1.2.1 主要溶液的配制 | 第30-32页 |
| 1.2.2 重组质粒pcDNA3.1 HisB-hlb的构建 | 第32-33页 |
| 1.2.3 质粒的提取 | 第33-34页 |
| 1.2.4 pcDNA HisB-hlb的测序和酶切鉴定 | 第34页 |
| 1.2.5 pcDNA HisB-hlb在MCF-7 中的表达 | 第34-35页 |
| 1.2.5.1 MCF-7 的培养 | 第34-35页 |
| 1.2.5.2 转染MCF-7 | 第35页 |
| 1.2.6 反转录 | 第35-37页 |
| 1.2.6.1 细胞总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 1.2.6.2 反转录合成cDNA | 第36-37页 |
| 1.2.7 PCR检测cDNA | 第37页 |
| 1.2.8 Western blot检测重组质粒的表达 | 第37-40页 |
| 1.2.8.1 细胞总蛋白的提取 | 第37-38页 |
| 1.2.8.2 SDS-PAGE电泳 | 第38-39页 |
| 1.2.8.3 转膜 | 第39页 |
| 1.2.8.4 封闭与抗体孵育 | 第39页 |
| 1.2.8.5 显色 | 第39页 |
| 1.2.8.6 曝光 | 第39-40页 |
| 2 结果 | 第40-43页 |
| 2.1 pcDNA3.1 HisB-hlb合成结果 | 第40页 |
| 2.2 pcDNA3.1 HisB-hlb的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 2.3 MCF-7 转染pcDNA3.1 HisB-hlb前后的观察 | 第41-42页 |
| 2.4 pcDNA3.1 HisB-hlb在MCF-7 中表达情况的检测 | 第42-43页 |
| 2.4.1 PCR检测细胞总RNA | 第42-43页 |
| 2.4.2 Western blot检测hlb的表达 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 实验三：β-溶血素的纯化及活性检测 | 第44-49页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| 1.1 材料 | 第44页 |
| 1.1.2 主要仪器和试剂见附录 | 第44页 |
| 1.2 方法 | 第44-46页 |
| 1.2.1 蛋白浓度的测定 | 第44-45页 |
| 1.2.2 β-溶血素的纯化 | 第45-46页 |
| 1.2.3 溶血效价的测定 | 第46页 |
| 1.2.3.1 1%红细胞悬液的制备 | 第46页 |
| 1.2.3.2 溶血效价的测定 | 第46页 |
| 2 结果 | 第46-47页 |
| 2.1 β-溶血素纯化结果 | 第46-47页 |
| 2.2 溶血效价测定结果 | 第47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 实验四：β-溶血素和重组质粒对小鼠的免疫保护 | 第49-57页 |
| 1 材料与方法 | 第49-53页 |
| 1.1 材料 | 第49-50页 |
| 1.1.1 菌株 | 第49页 |
| 1.1.2 实验动物 | 第49页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第49页 |
| 1.1.4 主要试剂 | 第49-50页 |
| 1.1.5 主要溶液的配制 | 第50页 |
| 1.2 方法 | 第50-53页 |
| 1.2.1 疫苗的制备和安全检验 | 第50页 |
| 1.2.2 动物免疫 | 第50-52页 |
| 1.2.3 免疫血清的制备 | 第52页 |
| 1.2.4 ELISA实验 | 第52-53页 |
| 1.2.5 攻毒实验 | 第53页 |
| 2 结果 | 第53-55页 |
| 2.1 疫苗的无菌和安全检验 | 第53页 |
| 2.2 ELISA测定结果 | 第53页 |
| 2.3 免疫保护结果 | 第53-55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58-63页 |
| 一、β-溶血素序列 | 第58-59页 |
| 二、所用试剂及试剂盒 | 第59-61页 |
| 三、所用仪器 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70-71页 |
| 导师简介 | 第71-72页 |
