| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第1章 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 端粒 | 第12-13页 |
| 1.2 端粒酶 | 第13-14页 |
| 1.2.1 hTERT的结构与功能 | 第14页 |
| 1.3 端粒酶表达水平的调控 | 第14-15页 |
| 1.4 端粒与细胞衰老 | 第15-16页 |
| 1.4.1 端粒学说 | 第15-16页 |
| 1.5 细胞永生化 | 第16-20页 |
| 1.5.1 细胞永生化的方法 | 第16-18页 |
| 1.5.2 端粒酶与细胞永生化 | 第18-19页 |
| 1.5.3 永生化细胞的应用 | 第19-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-43页 |
| 2.1 材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 仪器和器材 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要试剂的配置 | 第22-23页 |
| 2.1.4 质粒、菌株和细胞 | 第23-24页 |
| 2.2 | 第24-43页 |
| 2.2.1 引物的设计和合成 | 第24-25页 |
| 2.2.2 目的基因hTERT、P2A和EGFP的扩增 | 第25页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第25-26页 |
| 2.2.4 PCR产物纯化 | 第26页 |
| 2.2.5 目的片段hTERT-P2A-EGFP的获取 | 第26-27页 |
| 2.2.6 目的片段（hTERT-P2A-EGFP）和载体骨架（pRRL -）酶切 | 第27-28页 |
| 2.2.7 重组反应 | 第28页 |
| 2.2.8 转化 | 第28-29页 |
| 2.2.9 质粒提取 | 第29-30页 |
| 2.2.10 重组质粒酶切鉴定 | 第30页 |
| 2.2.11 重组质粒的序列测定和定点突变 | 第30-32页 |
| 2.2.12 HEK293FT细胞的培养 | 第32-34页 |
| 2.2.13 转染用质粒的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.14 质粒转染 | 第35-37页 |
| 2.2.15 流式细胞术检测质粒的转染效率 | 第37页 |
| 2.2.16 包病毒前质粒的准备 | 第37页 |
| 2.2.17 包装病毒 | 第37-40页 |
| 2.2.18 病毒感染人胚胎肝脏细胞 | 第40页 |
| 2.2.19 RT-PCR法检测细胞hTERT基因mRNA转录水平 | 第40-43页 |
| 第3章 实验结果 | 第43-52页 |
| 3.1 目的片段hTERT、P2A和EGFP获取 | 第43页 |
| 3.2 目的片段hTERT-P2A-EGFP的合成 | 第43-44页 |
| 3.3 载体和目的片段的酶切 | 第44页 |
| 3.4 连接反应和质粒筛选 | 第44-45页 |
| 3.5 重组质粒序列测定 | 第45页 |
| 3.6 质粒的定点突变 | 第45-49页 |
| 3.7 质粒转染HEK293FT细胞 | 第49页 |
| 3.8 重组质粒转染HEK293FT细胞的效率 | 第49页 |
| 3.9 重组慢病毒滴度的测定 | 第49-51页 |
| 3.10 病毒感染人胚胎肝脏细胞 | 第51页 |
| 3.11 RT-PCR检测hTERT基因的表达结果 | 第51-52页 |
| 第4章 讨论 | 第52-56页 |
| 4.1 hTERT | 第52-53页 |
| 4.2 EGFP | 第53-54页 |
| 4.3 P2A | 第54-56页 |
| 第5章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-69页 |
| 作者简介及在学期间所获得的科研成果 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
