| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-11页 |
| 1 引言 | 第11-19页 |
| 1.1 猪博卡病毒的最新研究概况 | 第11-14页 |
| 1.1.1 猪博卡病毒病原学 | 第11页 |
| 1.1.2 猪博卡病毒基因组学 | 第11-12页 |
| 1.1.3 猪博卡病毒的复制方式 | 第12页 |
| 1.1.4 猪博卡病毒致病性研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2 猪博卡病毒的流行病学和检测技术的最新研究概况 | 第14-18页 |
| 1.2.1 猪博卡病毒各型的流行情况 | 第14-15页 |
| 1.2.2 猪博卡病毒VP1 基因的同源性分析和遗传进化树的建立 | 第15-17页 |
| 1.2.3 猪博卡病毒检测诊断技术的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 本课题研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-27页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 病料 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 试验所用仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 猪博卡病毒截短VP2 和NP1 基因的克隆 | 第20-21页 |
| 2.2.2 NP1 蛋白和VP2 蛋白的生物信息学分析 | 第21页 |
| 2.2.3 NP1 基因VP2 截短基因重组克隆载体的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.4 重组质粒的提取及目的基因与表达载体PET-32a(+)的连接 | 第22-23页 |
| 2.2.5 重组质粒pET-NP1/pET-VP2 的诱导表达 | 第23-24页 |
| 2.2.6 重组蛋白的纯化 | 第24页 |
| 2.2.7 Western-Blot鉴定 | 第24页 |
| 2.2.8 间接ELISA方法的建立 | 第24-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-49页 |
| 3.1 结果 | 第27-47页 |
| 3.1.1 NP1 和VP2 基因的扩增 | 第27页 |
| 3.1.2 NP1 和 VP2 基因的理化性质及 B 细胞抗原表位的分析 | 第27-29页 |
| 3.1.3 重组克隆质粒pMD-NP1/pMD-VP2 的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.1.4 重组原核表达质粒的酶切鉴定及NP1 基因分析 | 第30-31页 |
| 3.1.5 重组原核表达菌PET-NP1/PET-VP2 的诱导表达 | 第31-35页 |
| 3.1.6 重组原核表达菌pET-NP1/pET-VP2 的可溶性分析和纯化 | 第35-36页 |
| 3.1.7 重组 NP1 蛋白和 VP2 蛋白的 Western blot 鉴定 | 第36-37页 |
| 3.1.8 ELISA的最佳工作条件及判定标准 | 第37-47页 |
| 3.2 ELISA方法的临床应用 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 4.1 猪博卡病毒的分离 | 第49页 |
| 4.2 PBoV NP1 基因和截短VP2 基因的克隆及原核表达 | 第49-50页 |
| 4.3 间接ELISA方法的建立 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第55-56页 |
| 作者简历 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
