一株鸭坦布苏病毒的全基因组测定及致病性研究
| 符号说明 | 第5-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 DTMUV概述 | 第13-19页 |
| 1.1.1 DTMUV的发现 | 第13页 |
| 1.1.2 DTMUV的病毒结构特征 | 第13-15页 |
| 1.1.3 DTMUV的培养特性 | 第15-16页 |
| 1.1.4 DTMUV的致病性及其对生产的影响 | 第16-18页 |
| 1.1.5 DTMUV的流行病学特征 | 第18-19页 |
| 1.2 DTMUV的诊断 | 第19-23页 |
| 1.2.1 病毒分离鉴定 | 第19页 |
| 1.2.2 血清学检测 | 第19-20页 |
| 1.2.3 RT-PCR | 第20-21页 |
| 1.2.4 套式RT-PCR | 第21页 |
| 1.2.5 实时荧光定量PCR方法 | 第21页 |
| 1.2.6 RT-LAMP | 第21-22页 |
| 1.2.7 核酸探针 | 第22页 |
| 1.2.8 电镜法 | 第22-23页 |
| 1.3 DTMUV综合防控 | 第23-24页 |
| 1.4 本研究目的意义 | 第24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 病例来源 | 第24-25页 |
| 2.1.2 实验动物及细胞 | 第25页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 试验仪器 | 第25页 |
| 2.1.5 实验地点 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 病毒的分离传代 | 第25-26页 |
| 2.2.1.1 样本的采集处理 | 第25-26页 |
| 2.2.1.2 分离株接种鸭胚 | 第26页 |
| 2.2.2 病原的RT -PCR检测 | 第26-28页 |
| 2.2.2.1 尿囊液总RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 RNA逆转录为cDNA | 第27页 |
| 2.2.2.3 RT-PCR检测 | 第27-28页 |
| 2.2.3 病毒的DEF细胞培养特性 | 第28-29页 |
| 2.2.3.1 原代DEF细胞制备 | 第28-29页 |
| 2.2.3.2 病毒感做及细胞培养 | 第29页 |
| 2.2.4 病毒毒力测定 | 第29-30页 |
| 2.2.4.1 TCID_(50)的测定 | 第29页 |
| 2.2.4.2 ELD_(50)的测定 | 第29-30页 |
| 2.2.5 分离株全基因组序列测定及遗传进化分析 | 第30-32页 |
| 2.2.5.1 引物设计 | 第30页 |
| 2.2.5.2 总RNA的抽提 | 第30页 |
| 2.2.5.3 全基因组的RT-PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.5.4 基因组序列的拼接 | 第31页 |
| 2.2.5.5 全基因组序列分析 | 第31-32页 |
| 2.2.5.6 E基因序列遗传变异分析 | 第32页 |
| 2.2.6 回归实验动物 | 第32-33页 |
| 2.2.7 血涂片制备 | 第33-34页 |
| 2.2.8 病理组织学检测 | 第34-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-45页 |
| 3.1 病毒的分离传代结果 | 第35-36页 |
| 3.2 病原RT-PCR检测结果 | 第36-37页 |
| 3.3 分离株的DEF细胞培养特性 | 第37-38页 |
| 3.4 病毒毒力测定 | 第38-39页 |
| 3.4.1 TCID_(50)的测定 | 第38页 |
| 3.4.2 ELD_(50)的测定 | 第38-39页 |
| 3.5 分离株全基因组序列测定及遗传进化分析 | 第39-40页 |
| 3.5.1 全基因组序列测定 | 第39页 |
| 3.5.2 基因组结构特征分析 | 第39-40页 |
| 3.5.3 E基因组序列遗传变异分析 | 第40页 |
| 3.6 回归实验动物 | 第40-45页 |
| 3.6.1 临床结果与分析 | 第40-42页 |
| 3.6.1.1 体温的变化 | 第40-41页 |
| 3.6.1.2 体重的变化 | 第41页 |
| 3.6.1.3 临床表现 | 第41-42页 |
| 3.6.1.4 攻毒后鸭采食量和产蛋量变化 | 第42页 |
| 3.6.2 临床症状及血细胞变化 | 第42页 |
| 3.6.3 大体剖检病变 | 第42-43页 |
| 3.6.4 生殖器官病变 | 第43-44页 |
| 3.6.5 病理组织学病变 | 第44-45页 |
| 4 讨论与分析 | 第45-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 6 参考文献 | 第48-54页 |
| 7 致谢 | 第54-55页 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况 | 第55-56页 |
| 9 全基因组序列 | 第56-59页 |
