| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-26页 |
| 1.1 大丽轮枝菌分类地位 | 第15-16页 |
| 1.1.1 大丽轮枝菌的分类地位 | 第15页 |
| 1.1.2 大丽轮枝菌的形态 | 第15页 |
| 1.1.3 大丽轮枝菌的生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.2 大丽轮枝菌的寄主与危害症状 | 第16-18页 |
| 1.2.1 大丽轮枝菌的寄主 | 第16页 |
| 1.2.2 大丽轮枝菌的危害症状 | 第16-18页 |
| 1.3 大丽轮枝菌的侵染过程 | 第18-19页 |
| 1.4 大丽轮枝菌的致病力分化 | 第19页 |
| 1.5 大丽轮枝菌的检测 | 第19-21页 |
| 1.5.1 ELISA检测 | 第19页 |
| 1.5.2 PCR法检测 | 第19-20页 |
| 1.5.3 RAPD和AFLP检测 | 第20页 |
| 1.5.4 RFLP检测 | 第20-21页 |
| 1.5.5 基因芯片检测 | 第21页 |
| 1.5.6 MALDI-TOF-MS检测 | 第21页 |
| 1.6 大丽轮枝菌的防治 | 第21页 |
| 1.7 大丽轮枝菌的致病机理研究 | 第21-24页 |
| 1.7.1 大丽轮枝菌致病机理研究 | 第21-22页 |
| 1.7.2 大丽轮枝菌致病基因 | 第22-24页 |
| 1.7.2.1 与生长与致病性相关的基因 | 第22页 |
| 1.7.2.2 适应寄主细胞环境的一些基因 | 第22-23页 |
| 1.7.2.3 致病性相关基因 | 第23页 |
| 1.7.2.4 大丽轮枝菌分泌蛋白基因研究 | 第23-24页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 特异基因的预测及分子验证 | 第26-34页 |
| 引言 | 第26页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-29页 |
| 2.2.1 特异基因组区段及VDG1上特异基因的预测 | 第27页 |
| 2.2.2 特异基因组区段的分泌蛋白预测 | 第27-28页 |
| 2.2.3 特异分泌蛋白的基因注释 | 第28页 |
| 2.2.4 特异分泌蛋白基因的群体分布分析 | 第28页 |
| 2.2.5 大丽轮枝菌的培养 | 第28页 |
| 2.2.6 大丽轮枝菌基因组DNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.7 特异分泌蛋白的PCR验证 | 第28-29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-32页 |
| 2.3.1 特异基因组区段上基因和分泌蛋白基因的预测 | 第29-31页 |
| 2.3.2 特异基因组区段的分泌蛋白PCR验证结果 | 第31页 |
| 2.3.3 六个特异分泌蛋白的在大丽轮枝菌群体中的分布研究 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 基因的克隆与表达特性分析 | 第34-49页 |
| 引言 | 第34页 |
| 3.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.1.1 主要仪器设备 | 第34页 |
| 3.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-40页 |
| 3.2.1 VDG1侵染军棉一号 | 第34-35页 |
| 3.2.2 军棉一号侵染组织总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 3.2.3 cDNA的合成 | 第36页 |
| 3.2.4 基因CDS序列的扩增 | 第36-37页 |
| 3.2.5 PCR产物回收 | 第37页 |
| 3.2.6 基因克隆 | 第37-38页 |
| 3.2.7 阳性质粒提取及测序 | 第38-39页 |
| 3.2.8 基因表达分析 | 第39-40页 |
| 3.2.9 基因的生物信息学分析 | 第40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-46页 |
| 3.3.1 基因全长CDS扩增结果 | 第40页 |
| 3.3.2 基因表达分析结果 | 第40-42页 |
| 3.3.3 六个基因的序列分析 | 第42-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-49页 |
| 3.4.1 木聚糖酶与木聚糖酯酶 | 第46-47页 |
| 3.4.2 果胶酶与果胶裂解酶 | 第47页 |
| 3.4.3 细胞壁降解酶分泌时间的差异 | 第47-48页 |
| 3.4.4 细胞壁降解酶在寄主植株上的分布差异 | 第48页 |
| 3.4.5 细胞壁降解酶在抗性不同的寄主上的分布差异 | 第48页 |
| 3.4.6 温湿度对细胞壁降解酶的影响 | 第48-49页 |
| 第四章 基因分泌特性验证 | 第49-56页 |
| 引言 | 第49页 |
| 4.1 实验材料 | 第49页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第49页 |
| 4.1.2 试剂仪器 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-53页 |
| 4.2.1 VDG1的培养 | 第49页 |
| 4.2.2 军棉1号的培养 | 第49页 |
| 4.2.3 VDG1侵染军棉1号总RNA的提取 | 第49-50页 |
| 4.2.4 总RNA反转录合成cDNA | 第50页 |
| 4.2.5 信号肽序列的扩增 | 第50页 |
| 4.2.6 信号肽载体的构建 | 第50-51页 |
| 4.2.7 信号肽载体转化酵母 | 第51-53页 |
| 4.2.8 信号肽活性鉴定 | 第53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-54页 |
| 4.3.1 信号肽序列扩增结果 | 第53页 |
| 4.3.2 信号肽活性验证结果 | 第53-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 大丽轮枝菌VDG1原生质体的制备 | 第56-61页 |
| 引言 | 第56页 |
| 5.1 实验材料 | 第56页 |
| 5.1.1 菌株 | 第56页 |
| 5.1.2 溶液及培养基配制 | 第56页 |
| 5.2 实验方法 | 第56-57页 |
| 5.2.1 原生质体的制备 | 第56-57页 |
| 5.2.2 原生质体的再生 | 第57页 |
| 5.3 结果与分析 | 第57-59页 |
| 5.3.1 原生质体的制备 | 第57-59页 |
| 5.3.2 再生培养基成分对原生质体再生率的影响 | 第59页 |
| 5.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第六章 特异分泌蛋白基因功能研究 | 第61-75页 |
| 引言 | 第61页 |
| 6.1 实验材料 | 第61页 |
| 6.1.1 菌株 | 第61页 |
| 6.1.2 培养基 | 第61页 |
| 6.1.3 试剂与试剂盒 | 第61页 |
| 6.2 实验方法 | 第61-68页 |
| 6.2.1 大丽轮枝菌基因组DNA的提取 | 第61-62页 |
| 6.2.2 敲除基因盒片段构建 | 第62-65页 |
| 6.2.3 PEG介导的抗性基因盒片段FF的转化 | 第65-66页 |
| 6.2.4 基因敲除转化子的筛选与鉴定 | 第66页 |
| 6.2.5 ?HSSP突变体表型测定 | 第66-68页 |
| 6.3 结果与分析 | 第68-73页 |
| 6.3.1 三片段融合获得抗性基因盒产物FF | 第68页 |
| 6.3.2 ΔHSSP突变体的获得与分子验证 | 第68-69页 |
| 6.3.3 ΔHSSP突变株的生物量测定 | 第69-70页 |
| 6.3.4 ΔHSSP突变体的生长表型 | 第70-71页 |
| 6.3.5 ΔHSSP突变体的致病力 | 第71-73页 |
| 6.4 讨论 | 第73-75页 |
| 第七章 全文结论 | 第75-78页 |
| 7.1 研究结论 | 第75-76页 |
| 7.1.1 高毒力菌株VDG1的六个特异分泌蛋白基因的获得 | 第75页 |
| 7.1.2 克隆了六个分泌蛋基因 | 第75页 |
| 7.1.3 对六个基因的表达特性进行了分析 | 第75页 |
| 7.1.4 六个预测的分泌蛋白的分泌特性进行了验证 | 第75页 |
| 7.1.5 建立了大丽轮枝菌原生质体制备方法 | 第75页 |
| 7.1.6 获得了五个特异分泌蛋白的单基因缺失突变株 | 第75-76页 |
| 7.2 后续工作 | 第76-78页 |
| 7.2.1 HSSP4的基因敲除 | 第76页 |
| 7.2.2 HSSP1和HSSP5的回补株构建 | 第76页 |
| 7.2.3 多基因敲除突变株的构建 | 第76页 |
| 7.2.4 侵染寄主过程中六个基因的定量PCR检测 | 第76页 |
| 7.2.5 特异分泌蛋白在不同致病型群体中的变异分析 | 第76页 |
| 7.2.6 基因在寄主植物中亚细胞定位和作用靶点 | 第76-77页 |
| 7.2.7 编码基因的酶活鉴定 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 附录Ⅰ 溶液及培养基配制 | 第85-87页 |
| 附录Ⅱ | 第87-90页 |
| VDG1特异基因组区段基因基本信息 | 第87-88页 |
| VDG1特异基因组区段基因基本信息 | 第88-89页 |
| VDG1特异基因组区段基因基本信息 | 第89-90页 |
| 附录Ⅲ | 第90-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 作者简介 | 第97页 |
