| 英文缩略词 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 家禽卵巢结构及发育特征 | 第12-16页 |
| 1.1.1 鸡卵巢结构及发育特点 | 第12-13页 |
| 1.1.2 卵泡膜细胞和颗粒细胞的作用 | 第13-14页 |
| 1.1.3 促性腺激素FSH和LH对家禽卵巢发育的调控 | 第14-16页 |
| 1.1.4 雌激素和孕酮对家禽卵巢发育的作用 | 第16页 |
| 1.2 GnRH1基因的生物学特征及在卵巢发育中的功能 | 第16-20页 |
| 1.2.1 GnRH1基因的生物学特征 | 第16-18页 |
| 1.2.2 GnRH1的组织分布及在卵巢发育中的功能 | 第18-20页 |
| 1.3 高通量测序技术及其应用 | 第20页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验动物及样本采集 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第22-23页 |
| 2.1.5 主要分子生物学数据库及软件 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-43页 |
| 2.2.1 核酸的提取、回收及检测 | 第23-26页 |
| 2.2.2 实时荧光定量PCR检测 | 第26-28页 |
| 2.2.3 免疫组织化学方法检测 | 第28-30页 |
| 2.2.4 GnRH1基因过表达载体的构建 | 第30-35页 |
| 2.2.5 GnRH1基因启动子区删除载体的构建 | 第35-38页 |
| 2.2.6 鸡卵泡颗粒细胞和膜细胞的分离培养 | 第38-40页 |
| 2.2.7 原代细胞处理和荧光素酶活性检测 | 第40-41页 |
| 2.2.8 GnRH1基因过表达膜细胞前后差异表达基因的筛选与验证 | 第41-43页 |
| 2.3 统计与分析 | 第43-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-58页 |
| 3.1 GnRH1 mRNA在鸡下丘脑和卵巢中的表达变化分析 | 第45-47页 |
| 3.1.1 总RNA的提取 | 第45页 |
| 3.1.2 GnRH1 mRNA在鸡开产前后下丘脑和卵巢的表达变化 | 第45-46页 |
| 3.1.3 GnRH1 mRNA在鸡开产后不同卵泡中的表达变化 | 第46页 |
| 3.1.4 GnRH1 mRNA在开产后卵泡膜细胞和颗粒细胞中的表达变化 | 第46-47页 |
| 3.1.5 GnRH1在卵巢和卵泡中的免疫定位 | 第47页 |
| 3.2 过表达GnRH1基因在颗粒细胞和膜细胞中的作用分析 | 第47-49页 |
| 3.2.1 GnRH1基因编码区的PCR扩增 | 第47-48页 |
| 3.2.2 pcDNA3.1-GnRH1载体的构建 | 第48页 |
| 3.2.3 GnRH1基因过表达后，LHR，FSHR，PGR和ERα基因的表达变化 | 第48-49页 |
| 3.3 FSH和LH激素对膜细胞GnRH1基因表达的影响 | 第49-50页 |
| 3.4 膜细胞中GnRH1基因介导的差异表达基因的筛选与验证 | 第50-55页 |
| 3.4.1 RNA质量检测 | 第50-51页 |
| 3.4.2 RNA-seq数据分析 | 第51-54页 |
| 3.4.2.1 差异基因的筛选 | 第51-53页 |
| 3.4.2.2 GO分类 | 第53页 |
| 3.4.2.3 Pathway分析 | 第53-54页 |
| 3.4.3 差异表达基因的qRT-PCR验证 | 第54-55页 |
| 3.5 GnRH1基因启动子区分析 | 第55-58页 |
| 3.5.1 鸡基因组DNA提取 | 第55-56页 |
| 3.5.2 GnRH1基因启动子区的PCR扩增 | 第56页 |
| 3.5.3 pGL-GnRH1pr-3876 载体序列比对分析 | 第56页 |
| 3.5.4 GnRH1启动子区删除载体的构建 | 第56-57页 |
| 3.5.5 双荧光素酶分析GnRH1基因启动子区不同片段活性 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 6 参考文献 | 第62-71页 |
| 7 硕士期间发表的论文及专利申请情况 | 第71-72页 |
| 8 致谢 | 第72页 |
