| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 前言 | 第10-17页 |
| 1.1 餐厨垃圾 | 第10页 |
| 1.2 脂肪酶（Lipase） | 第10-13页 |
| 1.2.1 脂肪酶的组成 | 第10-11页 |
| 1.2.2 脂肪酶的分子结构 | 第11-12页 |
| 1.2.3 微生物脂肪酶的应用 | 第12-13页 |
| 1.3 生物柴油的研究 | 第13-14页 |
| 1.4 毕赤酵母（Pichia pastoris）在表达外源蛋白中的应用 | 第14-15页 |
| 1.4.1 毕赤酵母 | 第14页 |
| 1.4.2 毕赤酵母表达系统 | 第14-15页 |
| 1.5 研究目的、意义及内容 | 第15-17页 |
| 第二章 米根霉脂肪酶在毕赤酵母中的重组表达 | 第17-39页 |
| 2.1 引言 | 第17页 |
| 2.2 实验材料 | 第17-20页 |
| 2.2.1 质粒与菌株 | 第17-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-30页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第20-21页 |
| 2.3.2 米根霉cDNA的合成 | 第21-22页 |
| 2.3.3 米根霉脂肪酶基因的扩增 | 第22-24页 |
| 2.3.4 米根霉proROL基因连接入T载体 | 第24页 |
| 2.3.5 pMD18-T-proROL转化大肠杆菌 | 第24-25页 |
| 2.3.6 pMD18-T-proROL阳性重组子菌落PCR鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3.7 pMD18-T-proROL阳性重组子限制性内切酶酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.8 pMD18-T-proROL阳性重组子DNA测序和蛋白质序列分析 | 第27页 |
| 2.3.9 毕赤酵母表达载体pGAPZαA-proROL的构建 | 第27-28页 |
| 2.3.10 表达载体pGAPZαA-proROL电转化毕赤酵母 | 第28-30页 |
| 2.4 实验结果 | 第30-38页 |
| 2.4.1 米根霉RNA的提取及proROL基因的扩增 | 第30-31页 |
| 2.4.2 proROL基因的T载体克隆及鉴定 | 第31-32页 |
| 2.4.3 pMD18-T-proROL阳性重组子DNA测序和蛋白质序列分析 | 第32-33页 |
| 2.4.4 毕赤酵母表达载体pGAPZαA-proROL的构建 | 第33-36页 |
| 2.4.5 重组毕赤酵母Pichia pastoris-proROL的构建及鉴定 | 第36-38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 重组毕赤酵母Pichia pastoris-proROL生长特性及酶活检测 | 第39-45页 |
| 3.1 前言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39-41页 |
| 3.2.1 菌株 | 第39页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第39页 |
| 3.2.3 主要试剂及溶液的配制 | 第39-40页 |
| 3.2.4 主要仪器和设备 | 第40-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-42页 |
| 3.3.1 重组毕赤酵母Pichia pastoris-proROL生长曲线的绘制及粗酶液的收集 | 第41页 |
| 3.3.2 重组脂肪酶proROL酶活的测定 | 第41-42页 |
| 3.3.4 重组毕赤酵母Pichia pastoris-proROL粗酶液的浓缩及SDS-PAGE分析 | 第42页 |
| 3.4 实验结果 | 第42-44页 |
| 3.4.1 重组毕赤酵母Pichia pastoris-proROL生长曲线及酶活曲线的绘制 | 第42-43页 |
| 3.4.2 重组脂肪酶的SDS-PAGE电泳分析 | 第43-44页 |
| 3.5 讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 重组脂肪酶酶学特性研究 | 第45-56页 |
| 4.1 前言 | 第45页 |
| 4.2 实验材料 | 第45-46页 |
| 4.2.1 菌株 | 第45页 |
| 4.2.2 试剂 | 第45-46页 |
| 4.3 试验方法 | 第46-47页 |
| 4.3.1 重组脂肪酶酶活力检测 | 第46页 |
| 4.3.2 重组脂肪酶最适温度及温度稳定性分析 | 第46页 |
| 4.3.3 重组脂肪酶最适pH及pH稳定性分析 | 第46页 |
| 4.3.4 不同表面活性剂对重组脂肪酶活力的影响 | 第46页 |
| 4.3.5 不同金属离子对重组脂肪酶活力的影响 | 第46-47页 |
| 4.3.6 不同有机溶剂对重组脂肪酶活力的影响 | 第47页 |
| 4.3.7 不同底物对重组脂肪酶活力的影响 | 第47页 |
| 4.4 实验结果 | 第47-54页 |
| 4.4.1 重组脂肪酶的最适温度及温度稳定性分析 | 第47-48页 |
| 4.4.2 重组脂肪酶的最适pH及pH稳定性分析 | 第48-49页 |
| 4.4.3 不同表面活性剂对重组脂肪酶酶活力的影响 | 第49-50页 |
| 4.4.4 不同金属离子对重组脂肪酶酶活力的影响 | 第50-51页 |
| 4.4.5 不同有机溶剂对重组脂肪酶酶活力的影响 | 第51-53页 |
| 4.4.6 重组脂肪酶底物特异性分析 | 第53-54页 |
| 4.5 讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 餐厨废弃油脂的提取及转酯化反应生产生物柴油 | 第56-65页 |
| 5.0 前言 | 第56页 |
| 5.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 5.1.1 餐厨垃圾 | 第56页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第56-57页 |
| 5.1.3 主要仪器及设备 | 第57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57-60页 |
| 5.2.1 餐厨废弃油脂的提取及性质分析 | 第57-59页 |
| 5.2.2 转酯化反应及不同反应因素对生物柴油产量的影响研究 | 第59-60页 |
| 5.3 实验结果 | 第60-63页 |
| 5.3.1 餐厨废弃油脂成分分析 | 第60页 |
| 5.3.2 水含量对转酯化反应效率的影响 | 第60-61页 |
| 5.3.3 醇油摩尔比对转酯化反应效率的影响 | 第61-62页 |
| 5.3.4 酶添加量对转酯化反应效率的影响 | 第62-63页 |
| 5.4 讨论 | 第63-65页 |
| 第六章 总结与展望 | 第65-67页 |
| 6.1 全文总结 | 第65-66页 |
| 6.2 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 附录 缩略语 | 第72-73页 |
| 在学期间发表论文 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
