| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-19页 |
| 1.1 猪流行性腹泻病毒 | 第12-16页 |
| 1.1.1 猪流行性腹泻病毒的发现及命名 | 第12-13页 |
| 1.1.2 猪流行性腹泻病毒的生物学分类地位 | 第13页 |
| 1.1.3 猪流行性腹泻病毒的分子特征和基因组结构 | 第13-14页 |
| 1.1.4 猪流行性腹泻病毒的结构蛋白和功能 | 第14-15页 |
| 1.1.5 猪流行性腹泻病毒的非结构蛋白和功能 | 第15-16页 |
| 1.2 猪流行性腹泻 | 第16页 |
| 1.2.1 猪流行性腹泻的流行情况 | 第16页 |
| 1.2.2 猪流行性腹泻的治疗 | 第16页 |
| 1.3 蛋白相互作用的研究方法 | 第16-18页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第19-28页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第19-24页 |
| 2.1.1 材料 | 第19页 |
| 2.1.2 引物设计与合成 | 第19页 |
| 2.1.3 细胞总RNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.1.4 第1链cDNA合成 | 第20-21页 |
| 2.1.5 LD-PCR扩增双链cDNA | 第21页 |
| 2.1.6 ds-cDNA的纯化 | 第21-22页 |
| 2.1.7 Y187感受态的制备 | 第22页 |
| 2.1.8 酵母转化 | 第22-23页 |
| 2.1.9 文库的收获 | 第23页 |
| 2.1.10文库的质量评价 | 第23-24页 |
| 2.2 结果与分析 | 第24-26页 |
| 2.2.1 细胞总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.2 LD-PCR扩增ds-cDNA | 第24-25页 |
| 2.2.3 ds-cDNA的纯化 | 第25页 |
| 2.2.4 文库滴度的计算 | 第25页 |
| 2.2.5 文库多样性鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3 讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 PEDV结构蛋白诱饵质粒的构建及酵母双杂交筛选与PEDV互作的蛋白 | 第28-40页 |
| 3.1 实验材料和方法 | 第28-35页 |
| 3.1.1 材料 | 第28页 |
| 3.1.2 引物设计及合成及PCR扩增目的片段 | 第28-30页 |
| 3.1.3 目的片段的胶回收 | 第30页 |
| 3.1.4 双酶切目的片段并与酶切后的pGBKT7载体连接 | 第30-31页 |
| 3.1.5 连接体系的转化 | 第31页 |
| 3.1.6 小量提取诱饵质粒 | 第31-32页 |
| 3.1.7 Y2H感受态的制备及酵母转化 | 第32-33页 |
| 3.1.8 评判标准 | 第33页 |
| 3.1.9 酵母双杂交筛蛋白 | 第33-34页 |
| 3.1.10 酵母质粒的提取 | 第34页 |
| 3.1.11 PCR鉴定并测序 | 第34-35页 |
| 3.2 结果 | 第35-37页 |
| 3.2.1 诱饵质粒的双酶切鉴定结果 | 第35页 |
| 3.2.2 自激活性及毒性检测结果 | 第35-36页 |
| 3.2.3 杂交筛选结果 | 第36页 |
| 3.2.4 回转验证结果 | 第36-37页 |
| 3.3 讨论 | 第37-40页 |
| 第四章 NDUFB3与N蛋白互作的Co-IP验证 | 第40-44页 |
| 4.1 实验材料和方法 | 第40-42页 |
| 4.1.1 材料 | 第40页 |
| 4.1.2 质粒的构建 | 第40页 |
| 4.1.3 质粒的转染 | 第40-41页 |
| 4.1.4 免疫共沉淀 | 第41-42页 |
| 4.2 结果 | 第42-43页 |
| 4.2.1 pAcGFP-NDUFB3质粒的构建及测序结果 | 第42页 |
| 4.2.2 Co-IP验证结果 | 第42-43页 |
| 4.3 讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 全文结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简历 | 第54页 |
