英文缩略词表(Abbreviation) | 第7-10页 |
中文摘要 | 第10-13页 |
英文摘要 | 第13-15页 |
1. 前言 | 第16-18页 |
2. 实验材料 | 第18-22页 |
2.1 细胞株、菌株 | 第18页 |
2.2 质粒 | 第18-19页 |
2.3 抗体 | 第19页 |
2.4 主要实验试剂 | 第19页 |
2.5 PCR引物的设计及合成 | 第19-20页 |
2.6 仪器设备 | 第20-22页 |
3. 实验方法 | 第22-41页 |
3.1 实验主要试剂的配制方法 | 第22-25页 |
3.2 质粒小抽 | 第25-26页 |
3.3 质粒大抽 | 第26-28页 |
3.4 石蜡切片免疫组织化学 | 第28-29页 |
3.5 石蜡切片免疫荧光 | 第29-30页 |
3.6 细胞免疫荧光 | 第30-31页 |
3.7 蛋白质免疫印迹(Immune Blot,IB) | 第31-33页 |
3.7.1 蛋白样品的制备 | 第31页 |
3.7.2 SDS-PAGE的胶的预制 | 第31-32页 |
3.7.3 蛋白上样及电泳 | 第32页 |
3.7.4 转膜 | 第32-33页 |
3.7.5 孵育抗体及IB检测 | 第33页 |
3.8 质粒的构建 | 第33-39页 |
3.8.1 引物的设计 | 第33-34页 |
3.8.2 细胞RNA的提取 | 第34-35页 |
3.8.3 扩增目的片段 | 第35-36页 |
3.8.4 凝胶电泳及胶回收 | 第36-37页 |
3.8.5 目的片段的酶切及连接 | 第37-38页 |
3.8.6 转化及摇菌 | 第38页 |
3.8.7 质粒酶切鉴定 | 第38-39页 |
3.9 细胞核浆蛋白分离 | 第39-40页 |
3.10细胞培养以及转染 | 第40页 |
3.11实验数据统计学分析 | 第40-41页 |
4. 实验结果 | 第41-63页 |
4.1 肝细胞癌组织中ER应激感应蛋白BiP/GRP78异位表达 | 第41-42页 |
4.2 低氧刺激诱导肝癌细胞株中BiP/GRP78的异位表达 | 第42-46页 |
4.3 BiP/GRP78与低氧诱导因子HIF1ɑ在细胞核中共定位表达 | 第46-48页 |
4.4 BiP/GRP78真核表达质粒的构建及验证 | 第48-51页 |
4.5 肝癌细胞株中低氧诱导ER应激相关蛋白上调表达 | 第51-55页 |
4.6 低氧对细胞存活的影响 | 第55-56页 |
4.7 上皮间质转化相关蛋白在肝癌组织中的表达 | 第56-60页 |
4.8 低氧刺激诱导ER应激及EMT相关基因mRNA的表达 | 第60-63页 |
5. 讨论 | 第63-66页 |
5.1 ER应激感应蛋白BiP/GRP78异位表达 | 第63-64页 |
5.2 肝癌细胞株中低氧刺激诱导ER应激 | 第64-65页 |
5.3 低氧刺激诱导改变肝癌细胞株EMT相关蛋白表达水平 | 第65-66页 |
6. 结论 | 第66页 |
7. 参考文献 | 第66-71页 |
附录 | 第71-74页 |
致谢 | 第74-76页 |
综述 | 第76-88页 |
参考文献 | 第82-88页 |