荷包红鲤胰蛋白酶的分离纯化及胰蛋白酶的固定化
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一部 荷包红鲤胰蛋白酶的分离纯化及部分性质测定 | 第9-43页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| 1 荷包红鲤 | 第9-10页 |
| ·简介 | 第9页 |
| ·荷包红鲤研究现状 | 第9-10页 |
| 2 鱼类消化酶 | 第10-11页 |
| ·概述 | 第10-11页 |
| ·消化酶的研究现状 | 第11页 |
| 3 胰蛋白酶的研究状况 | 第11-14页 |
| ·胰蛋白酶 | 第11-12页 |
| ·胰蛋白酶的激活 | 第12-13页 |
| ·胰蛋白酶的性质 | 第13-14页 |
| ·pH和温度对胰蛋白酶活性的影响 | 第13页 |
| ·鱼类食性对胰蛋白酶活性的影响 | 第13-14页 |
| ·金属离子和抑制剂对胰蛋白酶活性影响 | 第14页 |
| 4 胰蛋白酶的分离纯化 | 第14-17页 |
| ·胰蛋白酶分离纯化的研究进展 | 第14页 |
| ·胰蛋白酶分离纯化的方法 | 第14-16页 |
| ·前处理 | 第15页 |
| ·粗分级分离 | 第15-16页 |
| ·细分级分离 | 第16页 |
| ·胰蛋白酶的分子量 | 第16-17页 |
| 5 鱼类胰蛋白酶的研究意义 | 第17-18页 |
| 本文研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 材料和方法 | 第19-22页 |
| ·常用实验材料 | 第19页 |
| ·实验鱼 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·常规实验方法 | 第19-22页 |
| ·胰蛋白酶粗酶液的提取 | 第19-20页 |
| ·胰蛋白酶活性测定 | 第20页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第20页 |
| ·考马斯亮蓝染色法制备蛋白质标准曲线 | 第20-21页 |
| ·样品蛋白质含量的测定 | 第21-22页 |
| 第三章 荷包红鲤胰蛋白酶粗酶液提取条件的探究 | 第22-28页 |
| ·实验试剂配制 | 第22页 |
| ·实验方案 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-24页 |
| ·实验过程 | 第24页 |
| ·实验结果 | 第24-26页 |
| ·胰蛋白酶活力测定的不同底物法 | 第24-25页 |
| ·胰蛋白酶激活的最适钙离子浓度及激活时间 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| ·胰蛋白酶活力测定中底物的选择 | 第26-27页 |
| ·胰蛋白酶的最适激活条件 | 第27-28页 |
| 第四章 荷包红鲤胰蛋白酶的分离纯化 | 第28-38页 |
| ·实验方案 | 第28页 |
| ·实验过程 | 第28-29页 |
| ·荷包红鲤胰蛋白酶的提取 | 第28页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第28-29页 |
| ·最佳盐析条件的确定 | 第28-29页 |
| ·透析 | 第29-30页 |
| ·透析袋预处理 | 第29页 |
| ·透析袋的重复利用 | 第29页 |
| ·荷包红鲤胰蛋白酶粗酶液透析 | 第29-30页 |
| ·亲和层析 | 第30-31页 |
| ·上样 | 第30页 |
| ·洗脱 | 第30页 |
| ·清洗和再生 | 第30-31页 |
| ·亲和层析后样品和柱子的保存 | 第31页 |
| ·胰蛋白酶分子量的测定 | 第31-33页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·电泳操作步骤 | 第32-33页 |
| ·电泳迁移率的计算和标准曲线的制作 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-35页 |
| ·荷包红鲤胰蛋白酶最佳盐析条件的确定 | 第33-34页 |
| ·荷包红鲤胰蛋白酶亲和层析图谱 | 第34页 |
| ·荷包红鲤胰蛋白酶分子量 | 第34-35页 |
| ·荷包红鲤胰蛋白酶分离纯化的结果 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-38页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第36页 |
| ·亲和层析 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第37-38页 |
| 第五章 荷包红鲤胰蛋白酶部分性质的研究 | 第38-43页 |
| · | 第38-39页 |
| ·胰蛋白酶催化BAPNA水解反应的动力学(Km) | 第38-39页 |
| ·pH对胰蛋白酶反应速率的影响 | 第39页 |
| ·温度对胰蛋白酶反应速率的影响 | 第39页 |
| ·结果分析 | 第39-41页 |
| ·荷包红鲤胰蛋白酶的动力学常数Km | 第39-40页 |
| ·荷包红鲤胰蛋白酶的最适pH | 第40页 |
| ·荷包红鲤胰蛋白酶的最适温度 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·荷包红鲤胰蛋白酶的动力学常数Km | 第41页 |
| ·pH对荷包红鲤胰蛋白酶活性的影响 | 第41页 |
| ·温度对荷包红鲤胰蛋白酶活性的影响 | 第41-43页 |
| 第二部 胰蛋白酶的固定化 | 第43-52页 |
| 第一章 前言 | 第43-45页 |
| ·固定化技术 | 第43页 |
| ·固定化过程 | 第43页 |
| ·固定化材料 | 第43-44页 |
| ·固定化酶 | 第44-45页 |
| ·固定化酶的要求 | 第45页 |
| ·固定化对酶性质的影响 | 第45页 |
| ·本文研究内容 | 第45页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第45-48页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第45-46页 |
| ·实验试剂 | 第45-46页 |
| ·实验仪器 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-48页 |
| ·固定化胰蛋白酶活力的测定 | 第46页 |
| ·壳聚糖微粒的制备条件初探 | 第46页 |
| ·选择适宜的胰蛋白酶浓度做固定化 | 第46-47页 |
| ·固定化胰蛋白酶的制备 | 第47页 |
| ·固定化胰蛋白酶的性质检测 | 第47页 |
| ·固定化胰蛋白酶的最适pH值测定 | 第47页 |
| ·固定化胰蛋白酶的最适温度值测定 | 第47页 |
| ·固定化胰蛋白酶的重复使用 | 第47-48页 |
| ·固定化胰蛋白酶的Km值 | 第48页 |
| 第三章 实验结果和讨论 | 第48-52页 |
| ·壳聚糖微粒 | 第48页 |
| ·固定化胰蛋白酶的最适浓度 | 第48-49页 |
| ·固定化胰蛋白酶的最适pH | 第49-50页 |
| ·固定化胰蛋白酶的最适温度 | 第50-51页 |
| ·固定化胰蛋白酶的重复反应能力 | 第51页 |
| ·固定化处理对胰蛋白酶Km值的影响 | 第51-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
