| 摘要 | 第2-3页 |
| Summary | 第3页 |
| 项目来源 | 第4-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-16页 |
| 1.1 蛋白质粒导入大肠杆菌及其他细菌的研究 | 第7-9页 |
| 1.1.1 转化(transformation) | 第7-8页 |
| 1.1.2 转导(transduction) | 第8页 |
| 1.1.3 转化方式 | 第8页 |
| 1.1.4 电击转化和热激转化的区别与联系 | 第8页 |
| 1.1.5 热激转化的研究 | 第8-9页 |
| 1.2 根瘤菌标记技术的研究 | 第9-14页 |
| 1.2.1 传统根瘤菌标记方法 | 第9-10页 |
| 1.2.2 新型根瘤菌标记技术 | 第10页 |
| 1.2.3 新型根瘤标记技术的应用 | 第10-11页 |
| 1.2.4 根瘤菌标记方法的选择 | 第11页 |
| 1.2.5 现代常用的根瘤菌标记方法 | 第11-12页 |
| 1.2.6 三亲本杂交的特点及在根瘤菌研究中的应用 | 第12-13页 |
| 1.2.7 接合转移的影响因素 | 第13页 |
| 1.2.8 接合转移的优化研究 | 第13-14页 |
| 1.2.9 接合转移的不足之处 | 第14页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第14-15页 |
| 1.4 研究内容 | 第15页 |
| 1.5 技术路线 | 第15-16页 |
| 第二章 红、黄、绿三种颜色荧光质粒导入大肠杆菌的稳定性表达 | 第16-27页 |
| 2.1 试验材料与试剂 | 第17页 |
| 2.1.1 培养基 | 第17页 |
| 2.1.2 试验材料 | 第17页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.4 菌株与质粒载体及引物 | 第17页 |
| 2.1.5 仪器与设备 | 第17页 |
| 2.2 试验方法 | 第17-20页 |
| 2.2.1 绿、红、黄质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞 | 第17-18页 |
| 2.2.2 长斑情况及测序 | 第18页 |
| 2.2.3 引物设计与合成 | 第18页 |
| 2.2.4 目的基因的克隆 | 第18-20页 |
| 2.3 结果与分析 | 第20-24页 |
| 2.3.1 不同浓度连接液对红、黄、绿三种颜色蛋白质粒菌落生长的影响 | 第20-21页 |
| 2.3.2 不同退火温度对红、黄、绿三种颜色蛋白质粒PCR扩增的影响 | 第21-22页 |
| 2.3.3 红、黄、绿三种不同颜色蛋白质粒的碱基序列基因库比对 | 第22-24页 |
| 2.3.4 红、黄、绿三种不同颜色蛋白质粒转导的稳定性 | 第24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-25页 |
| 2.5 小结 | 第25-27页 |
| 第三章 三亲本杂交法构建苜蓿荧光标记根瘤菌 | 第27-35页 |
| 3.1 试验材料 | 第27-29页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第27-28页 |
| 3.1.2 培养基 | 第28-29页 |
| 3.1.3 选择平板的制备 | 第29页 |
| 3.2 接合转移流程 | 第29-30页 |
| 3.3 试验处理 | 第30-31页 |
| 3.3.1 以滤膜为杂交载体，红色荧光蛋白E.coliRFP123标记苜蓿根瘤菌 | 第30页 |
| 3.3.2 以滤膜为杂交载体，黄色荧光蛋白E.coliYFP69标记苜蓿根瘤菌 | 第30页 |
| 3.3.3 以滤膜为杂交载体，绿色荧光蛋白E.coliGFP104标记苜蓿根瘤菌 | 第30-31页 |
| 3.4 测定指标 | 第31页 |
| 3.4.1 转移接合率的计算 | 第31页 |
| 3.4.2 标记根瘤菌的遗传稳定性检测 | 第31页 |
| 3.5 数据处理及分析 | 第31页 |
| 3.6 结果与分析 | 第31-34页 |
| 3.6.1 不同颜色荧光蛋白供体菌株标记不同苜蓿根瘤菌的转移接合率 | 第31-32页 |
| 3.6.2 不同颜色荧光蛋白供体菌株标记不同苜蓿根瘤菌的接合子遗传稳定性 | 第32-34页 |
| 3.7 讨论 | 第34页 |
| 3.8 小结 | 第34-35页 |
| 第四章 标记根瘤菌对苜蓿幼苗生长影响的检测 | 第35-53页 |
| 4.1 供试材料 | 第35-36页 |
| 4.1.1 接种菌株 | 第35-36页 |
| 4.1.2 供试种子及表面处理药剂 | 第36页 |
| 4.1.3 Hoagland无氮营养液和培养基 | 第36页 |
| 4.2 试验方法 | 第36-37页 |
| 4.2.1 种子表面灭菌处理 | 第36页 |
| 4.2.2 苜蓿种子的发芽及播种 | 第36-37页 |
| 4.2.3 制备菌液及接种 | 第37页 |
| 4.3 测定指标和方法 | 第37-39页 |
| 4.3.1 生物量指标的测定 | 第37页 |
| 4.3.2 植物学指标的测定 | 第37页 |
| 4.3.3 固氮能力测定 | 第37-38页 |
| 4.3.4 叶绿素含量的测定 | 第38-39页 |
| 4.4 数据处理及分析 | 第39页 |
| 4.5 结果与分析 | 第39-50页 |
| 4.5.1 荧光标记根瘤菌及其出发菌株接种对苜蓿幼苗生物量形成的影响 | 第39-42页 |
| 4.5.2 荧光标记根瘤根瘤菌及其出发菌株接种对苜蓿幼苗植物学特征的影响 | 第42-45页 |
| 4.5.3 荧光标记根瘤菌及其出发菌株接种对苜蓿叶绿素含量的影响 | 第45-48页 |
| 4.5.4 荧光标记根瘤菌及其出发菌株接种对固氮能力的影响 | 第48-50页 |
| 4.6 讨论 | 第50-52页 |
| 4.7 小结 | 第52-53页 |
| 第五章 讨论与结论 | 第53-55页 |
| 5.1 讨论 | 第53-54页 |
| 5.2 结论 | 第54页 |
| 5.3 创新点 | 第54页 |
| 5.4 展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59-60页 |
| 导师简介 | 第60-61页 |
