| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第12-28页 |
| 1.1 miRNA的研究进展 | 第12-20页 |
| 1.1.1 miRNA的发现 | 第12页 |
| 1.1.2 miRNA的命名 | 第12-13页 |
| 1.1.3 miRNA的结构 | 第13页 |
| 1.1.4 miRNA的生成机制 | 第13-15页 |
| 1.1.5 miRNA的作用机制 | 第15-16页 |
| 1.1.6 黑腹果蝇miRNA的生物学功能 | 第16-19页 |
| 1.1.7 黑腹果蝇miRNA的研究意义 | 第19-20页 |
| 1.2 变态发育的研究进展 | 第20-24页 |
| 1.2.1 营养调控变态发育 | 第21页 |
| 1.2.2 细胞增殖和凋亡调控变态发育 | 第21-22页 |
| 1.2.3 激素调控变态发育 | 第22-24页 |
| 1.2.4 基因及通路调控变态发育 | 第24页 |
| 1.3 miRNA调控变态发育的研究进展 | 第24-26页 |
| 1.4 本论文研究的意义 | 第26页 |
| 1.5 本论文的创新点 | 第26-27页 |
| 1.6 技术路线 | 第27-28页 |
| 第2章 黑腹果蝇miR-11突变品系的表型特征研究 | 第28-47页 |
| 2.1 引言 | 第28-30页 |
| 2.2 材料、试剂和仪器 | 第30-32页 |
| 2.2.1 果蝇品系 | 第30-31页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第31页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-38页 |
| 2.3.1 果蝇培养 | 第32-33页 |
| 2.3.2 果蝇遗传操作系统及杂交 | 第33-34页 |
| 2.3.3 果蝇体长、体重的测量 | 第34-35页 |
| 2.3.4 果蝇(组织)大小的测量 | 第35页 |
| 2.3.5 果蝇总RNA的提取 | 第35页 |
| 2.3.6 果蝇基因的荧光定量PCR (qRT-PCR) | 第35-37页 |
| 2.3.7 果蝇miRNA荧光定量PCR | 第37-38页 |
| 2.4 结果 | 第38-46页 |
| 2.4.0 果蝇miR-11突变品系的构建 | 第38-40页 |
| 2.4.1 miR-11突变品系的miR-11和E2fl定量 | 第40-42页 |
| 2.4.2 miR-11敲除品系表型检测 | 第42-44页 |
| 2.4.3 miR-11敲除品系在不同发育阶段的表型检测 | 第44-45页 |
| 2.4.4 组织异位过表达miR-11品系的表型检测 | 第45-46页 |
| 2.5 讨论 | 第46-47页 |
| 第3章 果蝇miR-11靶基因的预测及筛选 | 第47-55页 |
| 3.1 引言 | 第47-48页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第48-49页 |
| 3.2.1 数据收集 | 第48页 |
| 3.2.2 多种软件预测miR-11靶标 | 第48页 |
| 3.2.3 miR-11靶基因功能注释和分类 | 第48-49页 |
| 3.2.4 miR-11靶基因的通路富集及分析 | 第49页 |
| 3.3 实验结果 | 第49-54页 |
| 3.3.1 miRanda和RNAhybrid预测miR-11潜在靶基因 | 第49-50页 |
| 3.3.2 miR-11靶基因的功能注释和分类 | 第50-52页 |
| 3.3.3 miR-11靶基因的通路富集及分析 | 第52页 |
| 3.3.4 筛选与变态发育相关的miR-11靶基因及靶位点分析 | 第52-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-55页 |
| 第4章 体内外验证miR-11与Ras85D、Sos的靶标关系 | 第55-77页 |
| 4.1 引言 | 第55-56页 |
| 4.2 材料、试剂和仪器 | 第56-59页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第56-58页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第58页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第58-59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-68页 |
| 4.3.1 果蝇品系的培养 | 第59页 |
| 4.3.2 果蝇总RNA的提取 | 第59-60页 |
| 4.3.3 果蝇基因的荧光定量PCR | 第60-61页 |
| 4.3.4 果蝇miRNA荧光定量PCR | 第61-63页 |
| 4.3.5 果蝇S2细胞的培养 | 第63页 |
| 4.3.6 荧光素酶报告系统的构建及检测 | 第63-66页 |
| 4.3.7 果蝇总蛋白的提取 | 第66页 |
| 4.3.8 Western Blotting | 第66-68页 |
| 4.4 实验结果 | 第68-75页 |
| 4.4.1 体内验证miR-11与Ras85D、Sos靶标关系 | 第68-72页 |
| 4.4.1.1 果蝇突变品系的构建 | 第68页 |
| 4.4.1.2 miR-11敲除和功能缺失品系的Ras、Sos mRNA定量 | 第68-70页 |
| 4.4.1.3 miR-11过表达品系Ras、Sos mRNA定量 | 第70-71页 |
| 4.4.1.4 miR-11敲除品系的Ras蛋白定量 | 第71-72页 |
| 4.4.2 体外验证miR-11与Ras85D、Sos靶标关系 | 第72-75页 |
| 4.4.2.2 过表达或者沉默miR-11细胞的Ras定量 | 第74-75页 |
| 4.4.2.3 其他miR-11的可能靶基因的检测 | 第75页 |
| 4.5 讨论 | 第75-77页 |
| 第5章 miR-11通过抑制Ras的表达调控蛹体长大小 | 第77-86页 |
| 5.1 引言 | 第77-78页 |
| 5.2 材料、试剂和仪器 | 第78-79页 |
| 5.2.1 实验材料果蝇品系 | 第78页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第78页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第78-79页 |
| 5.3 实验方法 | 第79-80页 |
| 5.3.1 双突变位点果蝇的杂交方法 | 第79页 |
| 5.3.2 黑腹果蝇体长测量 | 第79-80页 |
| 5.3.3 黑腹果蝇总RNA的提取 | 第80页 |
| 5.3.4 黑腹果蝇基因的荧光定量PCR | 第80页 |
| 5.3.5 黑腹果蝇miRNA荧光定量PCR | 第80页 |
| 5.4 实验结果 | 第80-84页 |
| 5.4.1 miR-11、Ras85D双突变株表型检测 | 第80-81页 |
| 5.4.2 野生型黑腹果蝇miR-11、Ras时间表达模式 | 第81-82页 |
| 5.4.3 miR-11挽救品系miR-11、Ras时间表达模式 | 第82-83页 |
| 5.4.4 miR-11敲除体品系miR-11、Ras时间表达模式 | 第83-84页 |
| 5.5 讨论 | 第84-86页 |
| 第6章 结论 | 第86-88页 |
| 附录A | 第88-97页 |
| 参考文献 | 第97-112页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
