| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-17页 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌 | 第10-12页 |
| 1.1.1 枯草芽孢杆菌的基本特征 | 第10-11页 |
| 1.1.2 枯草芽孢杆菌的工业应用 | 第11页 |
| 1.1.3 枯草芽孢杆菌的内源谷氨酸代谢 | 第11页 |
| 1.1.4 枯草芽孢杆菌L-谷氨酸转运蛋白 | 第11-12页 |
| 1.2 生物转化 | 第12-14页 |
| 1.2.1 生物发酵法 | 第12-13页 |
| 1.2.2 酶转化 | 第13页 |
| 1.2.3 全细胞转化 | 第13-14页 |
| 1.3 L-谷氨酸氧化酶 | 第14-15页 |
| 1.3.1 L-谷氨酸氧化酶简介 | 第14页 |
| 1.3.2 L-谷氨酸氧化酶研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 本课题立题意义及研究内容 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-20页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第17-18页 |
| 2.1.2 引物 | 第18页 |
| 2.1.3 培养基 | 第18-19页 |
| 2.1.4 工具酶与试剂 | 第19页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.2 常规分子实验操作 | 第20页 |
| 2.2.1 分子克隆的基本操作 | 第20页 |
| 2.2.2 B. subtilis WB600感受态细胞的制备与转化 | 第20页 |
| 2.3 重组大肠杆菌构建及表达 | 第20-22页 |
| 2.3.1 重组菌E. coli BL21/(pET-LGOXstr)的构建 | 第20-21页 |
| 2.3.2 重组菌E. coli BL21/(pET-LGOXkit)的构建 | 第21-22页 |
| 2.3.3 重组大肠杆菌的诱导表达 | 第22页 |
| 2.3.4 LGOX酶蛋白纯化 | 第22页 |
| 2.4 重组枯草芽孢杆菌的构建及全细胞转化 | 第22-27页 |
| 2.4.1 重组枯草芽孢杆菌的构建 | 第22-24页 |
| 2.4.2 重组枯草芽孢杆菌的诱导表达 | 第24页 |
| 2.4.3 不同诱导条件对重组菌产酶影响 | 第24页 |
| 2.4.4 重组菌的全细胞转化 | 第24页 |
| 2.4.5 B. subtilis WB600基因的敲除与LGOXstr基因的整合 | 第24-26页 |
| 2.4.6 LGOX与GltP共表达菌株的构建 | 第26-27页 |
| 2.5 分析测定方法 | 第27-30页 |
| 2.5.1 蛋白浓度测定 | 第27页 |
| 2.5.2 枯草芽孢杆菌细胞干重曲线的测定 | 第27页 |
| 2.5.3 LGOX酶活力测定 | 第27-28页 |
| 2.5.4 LGOX催化特性分析 | 第28页 |
| 2.5.5 重组枯草芽孢杆菌的生长曲线及酶活力测定 | 第28页 |
| 2.5.6 枯草芽孢杆菌谷氨酸吸收能力检测 | 第28-29页 |
| 2.5.7 α-酮戊二酸及L-谷氨酸的测定 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第30-46页 |
| 3.1 重组大肠杆菌的构建及LGOX催化特性分析 | 第30-36页 |
| 3.1.1 重组E. coli BL21/(pET-LGOXstr)的构建及LGOXstr催化特性 | 第30-33页 |
| 3.1.2 重组E. coli BL21/(pET-LGOXkit)的构建及LGOXkit催化特性 | 第33-36页 |
| 3.1.3 LGOXstr和LGOXkit催化特性比较 | 第36页 |
| 3.2 LGOX在枯草芽孢杆菌中的异源表达 | 第36-40页 |
| 3.2.1 重组表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.2.2 重组枯草芽孢杆菌的构建及酶活验证 | 第37页 |
| 3.2.3 重组菌生长曲线及诱导产酶曲线的测定 | 第37-38页 |
| 3.2.4 重组菌WB602的诱导表达 | 第38-39页 |
| 3.2.5 重组菌WB602的全细胞转化 | 第39-40页 |
| 3.3 基于枯草芽孢杆菌的代谢改造旁路途径对全细胞转化实验研究 | 第40-43页 |
| 3.3.1 glnA和amyE基因突变盒的构建 | 第40页 |
| 3.3.2 glnA和amyE基因突变菌株的构建 | 第40-41页 |
| 3.3.3 重组突变工程菌的构建及生长曲线测定 | 第41-42页 |
| 3.3.4 重组突变工程菌的全细胞转化 | 第42-43页 |
| 3.4 转运蛋白的过表达对全细胞转化实验影响 | 第43-46页 |
| 3.4.1 共表达菌株的构建 | 第43-44页 |
| 3.4.2 共表达菌株GltP的吸收功能验证及全细胞转化 | 第44-46页 |
| 主要结论与展望 | 第46-48页 |
| 主要结论 | 第46-47页 |
| 展望 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
