| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-19页 |
| 1 禽痛风的研究概述 | 第11-12页 |
| 1.1 发病原因 | 第11页 |
| 1.2 临床症状 | 第11页 |
| 1.3 病理变化 | 第11页 |
| 1.4 诊断与防治 | 第11-12页 |
| 2 IBV研究概述 | 第12-14页 |
| 2.1 IBV的研究进展 | 第12页 |
| 2.2 促进IBV适应细胞生长的方法 | 第12页 |
| 2.3 IBV的培养特性 | 第12-13页 |
| 2.3.1 鸡胚接种 | 第12-13页 |
| 2.3.2 细胞培养 | 第13页 |
| 2.3.3 鸡胚气管环培养 | 第13页 |
| 2.4 IBV检测方法研究进展 | 第13-14页 |
| 2.4.1 病毒分离 | 第13-14页 |
| 2.4.2 血清学试验 | 第14页 |
| 2.4.3 分子生物学试验 | 第14页 |
| 3 XOD的研究概述 | 第14-16页 |
| 3.1 XOD的生物学作用 | 第14-15页 |
| 3.2 XOD的代谢途径 | 第15-16页 |
| 3.3 XOD与禽痛风的关系 | 第16页 |
| 4 细胞凋亡及其相关基因 | 第16-19页 |
| 4.1 细胞凋亡 | 第16-17页 |
| 4.2 细胞凋亡基因 | 第17-19页 |
| 4.2.1 DDIT3 | 第17页 |
| 4.2.2 Bcl2家族 | 第17页 |
| 4.2.3 p53 | 第17-18页 |
| 4.2.4 Caspase-3 | 第18-19页 |
| 第二部分 试验研究 | 第19-51页 |
| 第一章 NIBV对原代鸡肾细胞生长的影响 | 第19-29页 |
| 1 材料 | 第19-20页 |
| 1.1 毒株与细胞 | 第19页 |
| 1.2 实验动物 | 第19页 |
| 1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 2 方法 | 第20-22页 |
| 2.1 原代鸡肾细胞的制备 | 第20页 |
| 2.2 原代鸡肾细胞生长曲线的测定 | 第20-21页 |
| 2.3 NIBV病毒株在原代鸡肾细胞中的传代适应 | 第21页 |
| 2.4 NIBV病毒株原代鸡肾细胞适应毒滴度的测定 | 第21页 |
| 2.5 NIBV病毒感染对原代鸡肾细胞细胞活力的影响 | 第21页 |
| 2.6 原代鸡肾细胞内及培养上清液中LDH活性的测定 | 第21-22页 |
| 2.6.1 样品的采集 | 第21-22页 |
| 2.6.2 LDH活性的测定 | 第22页 |
| 2.7 数据分析 | 第22页 |
| 3 结果 | 第22-26页 |
| 3.1 原代鸡肾细胞生长曲线的测定 | 第22-23页 |
| 3.2 NIBV病毒株对原代鸡细胞半数组织感染量的测定 | 第23-24页 |
| 3.3 NIBV病毒在原代鸡肾细胞上的适应 | 第24页 |
| 3.4 NIBV对原代鸡肾细胞活力的影响 | 第24-25页 |
| 3.5 NIBV对原代鸡肾细胞LDH含量的影响 | 第25-26页 |
| 4 讨论 | 第26-28页 |
| 4.1 NIBV病毒在原代鸡肾细胞上的适应 | 第26-27页 |
| 4.2 NIBV对原代鸡肾细胞活力的影响 | 第27-28页 |
| 4.3 NIBV对原代鸡肾细胞LDH含量的影响 | 第28页 |
| 5 小结 | 第28-29页 |
| 第二章 NIBV在体外培养原代鸡肾细胞内复制的动态变化 | 第29-37页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| 1.1 菌株，载体与细胞 | 第29页 |
| 1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 1.4 缓冲液及溶液配方 | 第29-30页 |
| 1.4.1 TBE缓冲液配方 | 第29-30页 |
| 1.4.2 LB培养基配方（1000mL） | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-32页 |
| 2.1 引物设计 | 第30页 |
| 2.2 标准品的制备 | 第30-32页 |
| 2.2.1 病毒RNA提取和cDNA的合成 | 第30页 |
| 2.2.2 阳性标准品的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.3 绝对定量SYBR Green real-time PCR检测NIBV病毒 | 第31页 |
| 2.2.4 NIBV病毒在原代鸡肾细胞内的动态复制变化 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-35页 |
| 3.1 NIBV病毒目的基因的扩增及序列比对 | 第32页 |
| 3.2 标准品的制备和标准曲线的建立 | 第32-34页 |
| 3.2.1 标准品质粒的浓度及拷贝数 | 第32页 |
| 3.2.2 标准曲线 | 第32-34页 |
| 3.3 N基因特异性RT-PCR检测感染病毒增殖结果 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| 4.1 标准品的制备和标准曲线的建立 | 第35页 |
| 4.2 N基因特异性RT-PCR检测病毒在原代鸡肾细胞上的增殖结果 | 第35-36页 |
| 5 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 NIBV对体外培养原代鸡肾细胞相关指标的影响 | 第37-44页 |
| 1 材料 | 第37页 |
| 1.1 主要试剂 | 第37页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-41页 |
| 3.1 NIBV对原代鸡肾细胞XOD活性的影响 | 第37-38页 |
| 3.2 NIBV对原代鸡肾细胞培养上清液中XOD活性的影响 | 第38页 |
| 3.3 NIBV对原代鸡肾细胞UA浓度的影响 | 第38-39页 |
| 3.4 NIBV对原代鸡肾细胞培养上清液UA浓度的影响 | 第39页 |
| 3.5 NIBV对原代鸡肾细胞SOD活性的影响 | 第39-40页 |
| 3.6 NIBV对原代鸡肾细胞培养上清液SOD活性的影响 | 第40页 |
| 3.7 NIBV对原代鸡肾细胞MDA浓度的影响 | 第40页 |
| 3.8 NIBV对原代鸡肾细胞培养上清液MDA浓度的影响 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 4.1 NIBV感染对原代鸡肾细胞XOD活性的影响 | 第41-42页 |
| 4.2 NIBV感染对原代鸡肾细胞UA浓度的影响 | 第42页 |
| 4.3 NIBV感染对原代鸡肾细胞SOD活性的影响 | 第42-43页 |
| 4.4 NIBV感染对原代鸡肾细胞MDA浓度的影响 | 第43页 |
| 5 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 NIBV对体外培养原代鸡肾细胞凋亡相关基因的影响 | 第44-51页 |
| 1 材料 | 第44-45页 |
| 1.1 实验试剂 | 第44页 |
| 1.2 仪器设备 | 第44页 |
| 1.3 引物 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-46页 |
| 2.1 样品的采集 | 第45页 |
| 2.2 细胞总RNA的提取 | 第45页 |
| 2.3 逆转录-聚合酶链反应 | 第45页 |
| 2.4 荧光定量PCR反应 | 第45-46页 |
| 2.5 数据处理 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-49页 |
| 3.1 NIBV对原代鸡肾细胞XOD mRNA表达量的影响 | 第46页 |
| 3.2 NIBV对原代鸡肾细胞Bcl2 mRNA表达量的影响 | 第46-47页 |
| 3.3 NIBV对原代鸡肾细胞Bak1 m RNA表达量的影响 | 第47-48页 |
| 3.4 NIBV对原代鸡肾细胞DDIT3 mRNA表达量的影响 | 第48页 |
| 3.5 NIBV对原代鸡肾细胞P53 mRNA表达量的影响 | 第48-49页 |
| 3.6 NIBV对原代鸡肾细胞Caspase-3 m RNA表达量的影响 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 5 小结 | 第50-51页 |
| 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
