| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 前言 | 第7-16页 |
| 材料与方法 | 第16-53页 |
| 1. 实验材料与仪器设备 | 第16-21页 |
| 1.1 脂肪组织特异性敲除Sirt6基因的小鼠模型 | 第16页 |
| 1.2 菌株和细胞系 | 第16页 |
| 1.3 质粒载体 | 第16-17页 |
| 1.4 工具酶及分子量标准 | 第17页 |
| 1.5 试剂盒 | 第17页 |
| 1.6 主要化学试剂(按试剂公司分列) | 第17-18页 |
| 1.7 主要仪器及设备 | 第18-19页 |
| 1.8 生物信息学软件及网络资源 | 第19页 |
| 1.9 分子生物学软件 | 第19页 |
| 1.10 引物序列 | 第19-21页 |
| 2. 实验方法 | 第21-53页 |
| 2.1 脂肪组织特异性敲除Sirt6小鼠模型的构建及基因型鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2 动物饲养和组织处理 | 第22页 |
| 2.3 测定小鼠的体重及食物摄入量 | 第22页 |
| 2.4 测定小鼠的体脂肪和瘦肉的含量 | 第22页 |
| 2.5 测定小鼠各组织的重量百分比 | 第22-23页 |
| 2.6 测定小鼠的能量消耗情况和静息代谢率 | 第23页 |
| 2.7 利用红外成像照相机和小动物体温计监测小鼠体温 | 第23页 |
| 2.8 诱导小鼠的白色脂肪组织发生棕色化 | 第23页 |
| 2.9 葡萄糖耐受实验(glucose tolerance test,GTT)和胰岛素耐受实验(insulintolerance test,ITT) | 第23-24页 |
| 2.10 组织化学切片和电镜切片的制备 | 第24页 |
| 2.11 小鼠生化、生理指标的测定 | 第24页 |
| 2.12 质粒载体的构建 | 第24-28页 |
| 2.13 细胞培养 | 第28-30页 |
| 2.14 细胞的瞬时转染 | 第30-32页 |
| 2.15 双荧光素酶报告实验测定启动子活性 | 第32-33页 |
| 2.16 脂肪来源的间充质干细胞的分离及培养 | 第33-35页 |
| 2.17 细胞的油红O染色 | 第35页 |
| 2.18 原代脂肪细胞能量代谢的测定(Seahorse Bioscience-XF Cell Mito Stress Test Kit) | 第35-36页 |
| 2.19 总RNA提取及cDNA合成 | 第36-38页 |
| 2.20 Real-Time PCR实验 | 第38-39页 |
| 2.21 细胞蛋白质的分离制备 | 第39-41页 |
| 2.22 Western Blot | 第41-46页 |
| 2.23 染色质免疫共沉淀实验(ChIP) | 第46-48页 |
| 2.24 蛋白质免疫共沉淀 | 第48页 |
| 2.25 重组腺病毒的构建 | 第48-50页 |
| 2.26 两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒及滴度测定 | 第50-52页 |
| 2.27 统计分析 | 第52-53页 |
| 实验结果 | 第53-88页 |
| 1. SIRT6在脂肪组织中的表达水平受多种因素的调控 | 第53-55页 |
| 2. 构建脂肪组织特异性敲除Sirt6的小鼠模型-SIRT6~(ad-/-) | 第55-56页 |
| 3. 脂肪组织特异性敲除Sirt6导致小鼠渐进性肥胖 | 第56-59页 |
| 4. 脂肪组织特异性敲除Sirt6使小鼠具有脂肪肝、高血脂症和胰岛素抵抗 | 第59-61页 |
| 5. 高脂饮食会加剧SIRT6~(ad-/-)小鼠的肥胖、脂肪肝、高血脂症和胰岛素抵抗等代谢异常表型 | 第61-63页 |
| 6. SIRT6~(ad-/-)小鼠发生肥胖后还伴随有炎症反应 | 第63-65页 |
| 7. 脂肪组织特异性敲除Sirt6导致小鼠棕色脂肪组织的产热功能受到抑制 | 第65-68页 |
| 8. 脂肪组织特异性敲除Sirt6使小鼠不适应冷刺激并且对CL316,243的介导的产热缺乏响应 | 第68-70页 |
| 9. 高脂饮食会加剧SIRT6~(ad-/-)小鼠产热功能的缺失 | 第70-71页 |
| 10. SIRT6对棕色脂肪细胞产热功能的调控具有细胞自主性 | 第71-74页 |
| 11. 脂肪组织特异性敲除Sirt6会抑制冷刺激和CL316,243介导的白色脂肪棕色化 | 第74-79页 |
| 12. SIRT6是促进小鼠白色脂肪组织棕色化的重要调控因子 | 第79-81页 |
| 13. 脂肪组织特异性敲除Sirt6导致磷酸化的ATF2对PGC-1α启动子区的结合减少,从而抑制产热基因的表达 | 第81-88页 |
| 讨论 | 第88-92页 |
| 小结 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-104页 |
| 附录 | 第104-113页 |
| 附录一: 英汉名词对照表 | 第104-109页 |
| 附录二: 质粒图谱 | 第109-112页 |
| 附录三: 腺病毒包装流程图 | 第112-113页 |
| 博士研究生学位论文综述 | 第113-122页 |
| 参考文献 | 第117-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 作者简介 | 第123-125页 |
