| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 前言 | 第9-11页 |
| 第2章 材料 | 第11-16页 |
| 2.1 实验主要试剂（菌株、抗体、载体） | 第11-13页 |
| 2.2 实验主要仪器 | 第13页 |
| 2.3 主要溶液的配置 | 第13-16页 |
| 2.3.1 5×TBE电泳缓冲液 | 第13-14页 |
| 2.3.2 LB固体培养基 | 第14页 |
| 2.3.3 LB液体培养基 | 第14页 |
| 2.3.4 电泳凝胶 | 第14页 |
| 2.3.5 磷酸缓冲盐液（PBS） | 第14页 |
| 2.3.6 LYSIS Buffer缓冲液 | 第14-15页 |
| 2.3.7 RIPA Buffer缓冲液 | 第15页 |
| 2.3.8 10×TBST溶液 | 第15页 |
| 2.3.9 DMEM完全培养基 | 第15页 |
| 2.3.10 细胞冻存液 | 第15页 |
| 2.3.11 SOC培养液 | 第15-16页 |
| 第3章 方法 | 第16-31页 |
| 3.1 小鼠组织RNA的提取 | 第16页 |
| 3.2 RT-PCR逆转录小鼠RNA合成cDNA | 第16-17页 |
| 3.3 Spag6L基因片段的扩增与筛选 | 第17-20页 |
| 3.3.1 引物设计 | 第17页 |
| 3.3.2 聚合酶链式反应（Polumerase Chain Reaction, PCR） | 第17-18页 |
| 3.3.3 PCR产物凝胶电泳 | 第18页 |
| 3.3.4 胶回收（PCR产物纯化） | 第18页 |
| 3.3.5 TA克隆及其连接产物的转化 | 第18-19页 |
| 3.3.6 筛选阳性菌落扩增 | 第19页 |
| 3.3.7 DNA质粒小量提取 | 第19页 |
| 3.3.8 Spag6L/PCR2.1 克隆重组质粒双酶切鉴定 | 第19-20页 |
| 3.3.9 目的片段DNA测序验证 | 第20页 |
| 3.4 Spag6L-GFP /Spag6L-pcDNA3表达载体质粒的构建与鉴定 | 第20-22页 |
| 3.4.1 重组质粒与载体的酶切 | 第20页 |
| 3.4.2 目的载体GFP/ pcDNA3与片段Spag6L的胶回收与纯化 | 第20-21页 |
| 3.4.3 载体GFP/ pcDNA3与片段Spag6L的连接转化 | 第21页 |
| 3.4.4 筛选菌落扩增 | 第21页 |
| 3.4.5 重组质粒Spag6L-GFP / Spag6L-pcDNA3 DNA提取 | 第21-22页 |
| 3.4.6 Spag6L-GFP / Spag6L-pcDNA3表达载体质粒双酶切鉴定 | 第22页 |
| 3.4.7 DNA测序验证 | 第22页 |
| 3.5 重组质粒GFP-Spag6L/pcDNA3-Spag6L转染CHO细胞/COS-7 细胞 | 第22-23页 |
| 3.6 质粒转染CHO细胞的免疫荧光染色实验 | 第23页 |
| 3.7 COS-7 细胞融合蛋白的收集提取 | 第23-24页 |
| 3.7.1 GFP-Spag6L/pcDNA3-Spag6L融合蛋白的提取 | 第23页 |
| 3.7.2 融合蛋白浓度的测定 | 第23-24页 |
| 3.8 Western blotting鉴定实验 | 第24-26页 |
| 3.9 双荧光素酶报告系统检测启动子转录调控序列功能活性 | 第26-31页 |
| 3.9.1 PGL3-Promoter重组质粒构建 | 第26-29页 |
| 3.9.2 细胞转染与蛋白收集 | 第29页 |
| 3.9.3 双荧光素酶实验 | 第29-31页 |
| 第4章 结果 | 第31-38页 |
| 4.1 Spag6与Spag6L核酸序列、氨基酸序列对比 | 第31-32页 |
| 4.2 小鼠Spag6L基因在睾丸组织表达丰富 | 第32页 |
| 4.3 重组真核表达质粒Spag6L/pEGFP-N2及Spag6L/pcDNA3鉴定 | 第32-33页 |
| 4.4 Western印迹检测Spag6L在转染细胞的表达 | 第33-34页 |
| 4.5 Spag6L在CHO细胞内的定位 | 第34-35页 |
| 4.6 Spag6L启动子调控序列在睾丸组织表达丰富 | 第35-36页 |
| 4.7 Spag6L Promoter PCR结果与重组表达质粒Spag6L /PGL3的鉴定 | 第36页 |
| 4.8 Spag6L启动子结合位点的功能分析 | 第36-38页 |
| 第5章 讨论 | 第38-41页 |
| 第6章 结语与展望 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 精子相关抗原研究进展及其在转化医学中的意义 | 第46-54页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 附录1 质粒载体图谱 | 第55-57页 |
| 附录2 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57-58页 |
| 附录3 攻读硕士学位期间从参加的科研项目 | 第58页 |
