| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 1 禽类 Toll 样受体及其研究进展 | 第14-24页 |
| ·Toll 样受体发现及配体识别 | 第14-15页 |
| ·禽类Toll 样受体及其作用 | 第15-22页 |
| ·TLR1 | 第15页 |
| ·TLR2 | 第15-16页 |
| ·TLR3 | 第16-19页 |
| ·TLR4 | 第19页 |
| ·TLR5 | 第19-20页 |
| ·TLR7 | 第20-21页 |
| ·TLR9 | 第21页 |
| ·鸡其它TLRs | 第21-22页 |
| ·禽类TLRs 研究的展望 | 第22页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 2 鸡 TLR3 全基因扩增、克隆表达及多克隆抗体制备 | 第24-50页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·鸡外周血淋巴细胞（PBLs）提取 | 第25-26页 |
| ·鸡外周血淋巴细胞总RNA 提取 | 第26页 |
| ·RT-PCR 分段扩增GX-sh-chTLR3 片段 | 第26-27页 |
| ·分段克隆GX-sh-chTLR3 全长片段及鉴定 | 第27-29页 |
| ·GX-sh-chTLR3 序列分析及功能区预测 | 第29页 |
| ·GX-sh-chTLR3 的chTLR3-LRR 片段扩增 | 第29-30页 |
| ·原核表达重组质粒的构建 | 第30-31页 |
| ·pET-chTLR3-LRR 阳性克隆鉴定 | 第31页 |
| ·pET-chTLR3-LRR 重组蛋白诱导表达 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE 检测蛋白表达 | 第31-32页 |
| ·蛋白表达条件优化 | 第32页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第32-33页 |
| ·Western-blot 检测抗体 | 第33页 |
| ·多抗与TLR3 蛋白的反应性检测 | 第33-34页 |
| ·实验结果 | 第34-47页 |
| ·RT-PCR 扩增A，B，C 目的片段 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| ·GX-sh-chTLR3 的序列分析 | 第36-40页 |
| ·GX-sh-chTLR3 蛋白疏水性和跨膜区分析结果 | 第40-41页 |
| ·GX-sh-chTLR3 蛋白质二级结构的预测分析结果 | 第41-42页 |
| ·GX-sh-chTLR3 蛋白质空间结构预测分析结果 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR 扩增chTLR3-LRR 片段及其重组质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE 检测蛋白表达 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白最佳诱导条件优化 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白多克隆抗体的Western-blotting 检测结果 | 第46-47页 |
| ·小结与讨论 | 第47-50页 |
| 3 IBDV 毒株 VP2 基因 Q-RT-PCR 标准曲线的建立 | 第50-60页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第51页 |
| ·RT-PCR 扩增IBDV-VP2 基因 | 第51-52页 |
| ·PCR 产物的克隆及鉴定 | 第52页 |
| ·IBDV-VP2 质粒标准品制备 | 第52页 |
| ·IBDV-VP2 质粒标准品荧光定量PCR 反应条件的建立 | 第52-53页 |
| ·灵敏度和重复性实验 | 第53页 |
| ·实验结果 | 第53-58页 |
| ·IBDV-VP2 基因的RT-PCR 扩增结果 | 第53-54页 |
| ·IBDV-VP2 基因的克隆及酶切鉴定 | 第54页 |
| ·标准品OD 值的测定及浓度的确定 | 第54-55页 |
| ·质粒标准品荧光定量PCR 方法的建立结果 | 第55-58页 |
| ·小结与讨论 | 第58-60页 |
| 4 荧光定量 PCR 法检测鸡 TLR3 与 IBDV 相关性初步研究 | 第60-79页 |
| ·实验材料 | 第60-61页 |
| ·实验方法 | 第61-66页 |
| ·鸡外周血淋巴细胞的原代培养及IBDV 病毒的感染 | 第61-62页 |
| ·IBDV 感染鸡外周血淋巴细胞后，病毒复制规律的测定 | 第62页 |
| ·IBDV 感染鸡外周血淋巴细胞后，TLR3 的表达动态测定 | 第62-64页 |
| ·IBDV 感染鸡外周血淋巴细胞后，细胞中TLR3 下游效应因子的表达量检测 | 第64页 |
| ·不同毒力株 IBDV 感染鸡外周血淋巴细胞后，病毒复制量测定 | 第64-65页 |
| ·不同毒力株IBDV 感染鸡外周血淋巴细胞后，TLR3 的表达量测定 | 第65页 |
| ·不同毒力株IBDV 感染鸡外周血淋巴细胞后，细胞中TLR3 下游效应因子的表达量测定 | 第65页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析方法 | 第65-66页 |
| ·实验结果 | 第66-76页 |
| ·RT-PCR 扩增TLR3、IL-8、IFNβ目的片段 | 第66页 |
| ·IBDV 感染鸡外周血淋巴细胞后，病毒复制规律的结果分析 | 第66-68页 |
| ·IBDV 感染鸡外周血淋巴细胞后，TLR3 的动态表达结果分析 | 第68-69页 |
| ·IBDV 感染鸡外周血淋巴细胞后，细胞中TLR3 下游效应因动态表达结果分析 | 第69-71页 |
| ·不同毒力株IBDV 感染鸡外周血淋巴细胞后，病毒复制的结果分析 | 第71-73页 |
| ·不同毒力株IBDV 感染鸡外周血淋巴细胞后，TLR3 的表达结果分析 | 第73-74页 |
| ·不同毒力株IBDV 感染鸡外周血淋巴细胞后，IFNβ和IL-8 的表达结果分析 | 第74-76页 |
| ·小结与讨论 | 第76-79页 |
| ·结果分析与讨论 | 第76-78页 |
| ·方法讨论 | 第78-79页 |
| 5 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第88页 |
