| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-14页 |
| 1.2 碳酸酐酶 | 第14-20页 |
| 1.2.1 碳酸酐酶的简介 | 第14-16页 |
| 1.2.2 碳酸酐酶的功能 | 第16-17页 |
| 1.2.3 碳酸酐酶的作用机制 | 第17-18页 |
| 1.2.4 碳酸酐酶的研究进展及应用 | 第18-20页 |
| 1.3 南极冰藻 | 第20-22页 |
| 1.3.1 南极冰藻概况 | 第20-21页 |
| 1.3.2 南极冰藻Chlamydomonas sp. ICE-L | 第21-22页 |
| 1.4 本论文研究内容及意义 | 第22-25页 |
| 第二章 Chlamydomonas sp. ICE-L α-CA的克隆及生物信息学分析 | 第25-45页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.1 藻种及培养方法 | 第25页 |
| 2.1.2 仪器药品及引物 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2 反转录 | 第27-28页 |
| 2.2.3 转录组 α-CA片段验证 | 第28页 |
| 2.2.4 RACE扩增 | 第28-31页 |
| 2.2.5 PCR产物的检测与纯化 | 第31页 |
| 2.2.6 α-CA的全基因验证 | 第31页 |
| 2.2.7 α-CA的生物信息学分析 | 第31-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-42页 |
| 2.3.1 RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.3.2 α-CA片段验证 | 第34-35页 |
| 2.3.3 RACE扩增 | 第35页 |
| 2.3.4 α-CA全基因验证 | 第35-36页 |
| 2.3.5 α-CA的生物信息学分析 | 第36-42页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第42-45页 |
| 第三章 胁迫条件下Chlamydomonas sp. ICE-L α-CA的表达调控 | 第45-53页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第45页 |
| 3.1.1 实验藻种 | 第45页 |
| 3.1.2 仪器及试剂 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 3.2.1 实验前处理 | 第45-46页 |
| 3.2.2 RNA提取 | 第46页 |
| 3.2.3 qRT-PCR反转录 | 第46-47页 |
| 3.2.4 qRT-PCR | 第47页 |
| 3.3 结果与分析 | 第47-50页 |
| 3.3.1 紫外胁迫条件下 α-CA的表达调控 | 第47-48页 |
| 3.3.2 不同温度胁迫条件下 α-CA的表达调控 | 第48-49页 |
| 3.3.3 不同盐度胁迫条件下 α-CA的表达调控 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第50-53页 |
| 第四章 Chlamydomonas sp. ICE-L α-CA的原核表达及纯化 | 第53-63页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第53-54页 |
| 4.1.1 实验藻种 | 第53页 |
| 4.1.2 仪器及试剂 | 第53-54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-57页 |
| 4.2.1 RNA提取 | 第54页 |
| 4.2.2 反转录 | 第54页 |
| 4.2.3 α-CA的ORF基因调取 | 第54页 |
| 4.2.4 连接 | 第54-55页 |
| 4.2.5 转化 | 第55页 |
| 4.2.6 PCR鉴定连接产物正反性 | 第55页 |
| 4.2.7 质粒提取 | 第55-56页 |
| 4.2.8 质粒转化 | 第56页 |
| 4.2.9 蛋白表达 | 第56-57页 |
| 4.2.10 蛋白纯化 | 第57页 |
| 4.3 结果与分析 | 第57-60页 |
| 4.3.1 α-CA的ORF基因调取 | 第57-58页 |
| 4.3.2 连接产物正反性检测 | 第58页 |
| 4.3.3 α-CA蛋白表达 | 第58-59页 |
| 4.3.4 镍柱纯化 α-CA | 第59-60页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第60-63页 |
| 第五章 南极冰藻Chlamydomonas sp. ICE-L α-CA的酶活测定 | 第63-69页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第63-64页 |
| 5.1.1 实验藻种 | 第63页 |
| 5.1.2 仪器及试剂 | 第63-64页 |
| 5.2 实验方法 | 第64页 |
| 5.2.1 蛋白浓度测定 | 第64页 |
| 5.2.2 碳酸酐酶CO_2水合酶活性测定 | 第64页 |
| 5.2.3 碳酸酐酶酯酶活性测定 | 第64页 |
| 5.3 结果与分析 | 第64-66页 |
| 5.3.1 蛋白浓度 | 第64-65页 |
| 5.3.2 碳酸酐酶CO_2水合酶活性 | 第65页 |
| 5.3.3 碳酸酐酶酯酶活性 | 第65-66页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第66-69页 |
| 第六章 Chlamydomonas sp. ICE-L其他 α-CA的克隆及生物信息学分析 | 第69-81页 |
| 6.1 材料与仪器 | 第69页 |
| 6.1.1 实验藻种 | 第69页 |
| 6.1.2 仪器及试剂 | 第69页 |
| 6.2 实验方法 | 第69-70页 |
| 6.2.1 RNA提取 | 第69页 |
| 6.2.2 反转录 | 第69页 |
| 6.2.3 α-CA2、α-CA3、α-CA4全基因的扩增 | 第69-70页 |
| 6.2.4 α-CA2、α-CA3、α-CA4生物信息学分析 | 第70页 |
| 6.3 结果与分析 | 第70-77页 |
| 6.3.1 α-CA2、α-CA3、α-CA4全基因PCR扩增 | 第70-71页 |
| 6.3.2 α-CA2生物信息学分析 | 第71-72页 |
| 6.3.3 α-CA3生物信息学分析 | 第72-75页 |
| 6.3.4 α-CA4生物信息学分析 | 第75-77页 |
| 6.4 讨论与小结 | 第77-81页 |
| 第七章 总结及后续工作计划 | 第81-83页 |
| 7.1 总结 | 第81-82页 |
| 7.2 后续工作计划 | 第82-83页 |
| 论文创新点 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 硕士期间发表文章 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
