| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-30页 |
| ·绪论 | 第11-12页 |
| ·酶的名称和系统 | 第12-13页 |
| ·酶的命名 | 第12-13页 |
| ·酶的分类 | 第13页 |
| ·水解酶 | 第13-16页 |
| ·水解酶介绍 | 第13-14页 |
| ·酯键水解酶 | 第14-16页 |
| ·多功能蛋白质 | 第16-22页 |
| ·蛋白质序列、功能、结构和机制的一致性 | 第16-18页 |
| ·双功能蛋白质(兼职蛋白质moonlighting proteins) | 第18-19页 |
| ·蛋白质催化混杂性(catalytic promiscuity) | 第19-20页 |
| ·多功能酶(multifunctional enzyme) | 第20-22页 |
| ·脂肪酶 | 第22-28页 |
| ·脂肪酶的简介 | 第22-23页 |
| ·脂肪酶催化反应的特异性 | 第23-24页 |
| ·脂肪酶的分类 | 第24-28页 |
| ·本论文的研究目的及实验方案 | 第28-30页 |
| ·本论文的研究目的 | 第28-29页 |
| ·本论文的实验方案 | 第29-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-43页 |
| ·实验材料 | 第30-33页 |
| ·文库来源 | 第30页 |
| ·菌株、质粒和蛋白质 | 第30-31页 |
| ·培养基、生长条件及抗生素 | 第31页 |
| ·菌种保存 | 第31-32页 |
| ·使用试剂 | 第32页 |
| ·常规溶液、缓冲液 | 第32页 |
| ·常规仪器 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-43页 |
| ·试剂盒快速抽提质粒DNA | 第33页 |
| ·胶回收目地DNA片段 | 第33-34页 |
| ·PCR产物纯化试剂盒纯化 | 第34页 |
| ·DNA的酶切和连接 | 第34-42页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第42-43页 |
| 第三章 双功能酶基因的生物信息学分析和酶学验证 | 第43-54页 |
| ·双功能酶编码基因的来源 | 第43页 |
| ·生物信息学分析 | 第43-44页 |
| ·核苷酸序列相似性检索 | 第43页 |
| ·蛋白质氨基酸序列相似性检索 | 第43-44页 |
| ·氨基酸序列的同源性比对 | 第44-45页 |
| ·分子进化与系统发育分析 | 第45-46页 |
| ·目标蛋白的酶学特性分析 | 第46-53页 |
| ·最适PH值 | 第47页 |
| ·最适反应温度 | 第47-48页 |
| ·酶活单位 | 第48页 |
| ·pH值耐受性分析 | 第48-49页 |
| ·热稳定性分析 | 第49-50页 |
| ·酶促动力学 | 第50-51页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第51-52页 |
| ·EDTA对酶活力的影响 | 第52-53页 |
| ·酶的半衰期的测定 | 第53页 |
| ·总结 | 第53-54页 |
| 第四章 突变体文库的构建及活性克隆的筛选、序列测定和结果分析 | 第54-63页 |
| ·突变体构建的理论基础 | 第54页 |
| ·突变体库的构建 | 第54-57页 |
| ·双功能酶基因的易错PCR扩增 | 第54-55页 |
| ·突变体重组质粒的构建和表达 | 第55-57页 |
| ·原酶和突变酶酶学性质比较 | 第57-60页 |
| ·酶反应的最适温度 | 第58页 |
| ·酶反应的最适pH | 第58-59页 |
| ·酶的热稳定性的测定 | 第59-60页 |
| ·突变酶和原酶的序列测序分析 | 第60-63页 |
| 第五章 总结、讨论与展望 | 第63-68页 |
| ·总结 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| ·双功能蛋白(双功能酶)的分析 | 第63-64页 |
| ·新型脂肪酶蛋白质家族的建立 | 第64页 |
| ·突变位点的突变酶性质分析 | 第64页 |
| ·作用机理 | 第64-65页 |
| ·酶学特性 | 第65页 |
| ·展望 | 第65-68页 |
| ·双功能蛋白质的催化机理分析 | 第65-66页 |
| ·酶的改造 | 第66-67页 |
| ·人工酶 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第75-76页 |
| 附录 | 第76-79页 |
